高速逆流色谱分离与鉴定鹿药中黄酮类化合物

《高速逆流色谱分离与鉴定鹿药中黄酮类化合物 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、高速逆流色谱分离与鉴定鹿药中黄酮类化合物赵淑杰韩梅韩忠明李彦颖杨利民【摘要】采用高速逆流色谱(HSCCC)与其它色谱联用的方法分离纯化鹿药中的化学成分，得到5个黄酮类化合物：5,7,3＇,4＇四羟基3甲氧基8甲基黄酮(1)、8甲基木犀草素(2)、3＇甲氧基木犀草素(3)、木犀草素(4)和槲皮素(5)，它们均为首次自该种及该属植物中分离得到。HSCCC以V(氯仿)∶V(甲醇)∶V(水)=4∶3∶2混合液为溶剂，上相为固定相，下相为流动相，分离纯化得到3个分别含化合物1，4和5的主要部分，经HPLC检验纯度分别为98.3%，96.7%和95.3%;还有1个含有化合物

2、2和3的较纯部分，通过SephadexLH20柱色谱，以V(甲醇)∶V(水)=1∶1混合液洗脱将二者分离。通过理化性质及紫外、红外、质谱、核磁等波谱分析确定化合物结构。【关键词】鹿药，高速逆流色谱，黄酮类化合物，木犀草素，槲皮素　1引言　　鹿药为百合科鹿药属植物鹿药(SmilacinajaponicaA.Gray)的干燥根茎，是我国民间常用中药[1]。《中药大辞典》中记载，性味“甘、苦、温，无毒”，具有补气益肾、祛风除湿、活血调经功能，用于治疗风湿骨痛、神经性头痛、乳腺炎、月经不调、痈疖肿毒及跌打损伤等[2]。鹿药属植物全世界约有25种，我国有14种，2个变种[3]，几乎全

3、国各地都有所分布，资源十分丰富，许多种为药食两用植物，根茎入药[4]，地上幼嫩部分是受人们喜爱的山野菜。已有人从中分离出皂苷类化合物，药理研究表明其具有抗真菌和抗肿瘤活性[5,6]。吉林省中西部地区分布有鹿药、兴安鹿药(S.dahuricaTurcz.exFisch.etMey)和三叶鹿药(S.trifoliaDesf)，野生资源储量很大，特别是鹿药，但尚未得到有效的研究、开发与利用。对其化学成分进行研究，将为探明其药用功效和开发新药源提供参考依据。　　高速逆流色谱(HSCCC)与传统色谱相比，具有对样品无不可逆吸附、仪器操作简单、分离量大、样品易回收、重现性好等优点，因此被

4、广泛应用于天然产物的分离制备[7]。　　本研究采用高速逆流色谱结合其它色谱，从鹿药中分离出5,7,3＇,4＇四羟基3甲氧基8甲基黄酮、8甲基木犀草素、3＇甲氧基木犀草素、木犀草素和槲皮素共5个黄酮类化合物。2实验部分　　2.1仪器、试剂与材料　　DL1000E智能超声波清洗器(上海之信仪器有限公司);TBE300A高速逆流色谱仪(上海同田生化技术有限公司);N2000色谱工作站(浙江大学智达信息工程有限公司);1100高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司);FTIR8400S红外光谱仪，UV1700紫外分光光度计(日本岛津公司);AV400核磁共振仪(

5、瑞士Bruker公司);MATLCQ电喷雾质谱仪(美国Finigan公司)。D101型大孔树脂(天津市海光化工有限公司);SephadexLH20(Pharmacia产品);甲醇与乙腈为色谱纯(美国FisherChemAlertGuide公司);水为纯净水;其余试剂为分析纯。　　鹿药采自吉林省九台市土门岭地区，经吉林农业大学中药材学院杨利民教授鉴定确认。将其洗净后自然阴干，机械粉碎，备用。　　2.2样品制备　　取粉碎的鹿药根茎2.80kg，加5倍体积的90%乙醇超声提取3次，合并滤液并减压浓缩至无醇味;将浸膏水溶后过D101大孔树脂柱，依次用水及30%，50%，70%和90

6、%的乙醇洗脱，每次洗脱至流出液无色为止，将各洗脱部分浓缩至干，备用。取70%乙醇洗脱部分(12g)干法上硅胶柱(粒径0.098～0.05mm)，V(氯仿)∶V(甲醇)=9∶1～2∶8，梯度洗脱，得7个流份;选取其中流份Ⅰ(0.993g)和流份Ⅱ(0.490g)作为样品进行HSCCC分离。　　2.3两相溶剂的选择　　选择两相溶剂系统是通过目标化合物的分配系数K来确定的。K值通过HPLC检测确定，步骤如下：取大约1mg样品放入试管中，加入已平衡的两相溶剂系统，上、下相溶剂各2.0mL，充分振摇溶解后静置分层，分别取上、下相用HPLC检测，上相和下相的峰面积分别为AU和AL，分配系

7、数K=AU/AL。　　2.4高效液相色谱分析　　采用HPLC检测流份Ⅰ和Ⅱ的成分及经HSCCC分离后各色谱峰的纯度。HPLC分析条件：DikmaC18色谱柱(200mm×4.6mm，5μm);流动相为乙腈水,梯度洗脱：0min,30%乙腈;20min,35%乙腈;30min,40%乙腈;40min,50%乙腈。流速l.0mL/min;检测波长为254nm;柱温30℃。　　2.5高速逆流色谱分离条件　　按V(氯仿)∶V(甲醇)∶V(水)=4∶3∶2将所有溶剂加入分液漏斗中，充分振摇后静置24h分相;上相