新疆石榴皮等9种天然药物植物雌激素活性的实验研究论文

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1、新疆石榴皮等9种天然药物植物雌激素活性的实验研究论文帕丽达·阿不力孜，王晓文，热娜·卡斯木‘【摘要】目的对几种天然药物进行植物雌激素的活性筛选。方法采用人乳腺癌细胞增殖法与酵母菌雌激素筛检实验法对9种天然药物进行了植物雌激素活性的研究。结果成功地建立了E-SCREEN法与YeastEstrogenScreen实验法，此两种方法均可检测到1×10-13mol/L的雌二醇。MCF-7细胞增殖实验结果表明，鹰嘴豆、新疆石榴皮、罗勒、枸杞水提取物可促使ER（＋）MCF-7细胞的增殖（P＜0.05），提示它们具有植物雌激素样活性；酵母双杂交（Yeasttod

2、-ulators,SERMs)或中药选择性雌激素受体调节剂。对中药植物雌激素活性筛选、活性成分及其作用机制、特别是关于这些成分对雌激素依赖性肿瘤细胞增殖的影响的研究尚不够深入。本研究在上报的茯苓等中药雌激素活性筛选的基础上，选择课题组正在研究的富含黄酮类、香豆素类、木脂素类及二苯乙烯类成分的新疆石榴皮、红景天、罗勒、阿里红、枸杞、肉苁蓉、锁阳、鹰嘴豆、新疆鼠尾草等9种天然药物，对其植物雌激素活性进行了初步的筛选。1材料与仪器1.1药物新疆石榴皮PunicagranatumL.（购自新疆南疆）；罗勒OcimunbasilicumL.（采自新疆吐鲁番市

3、）；红景天RhodiolaroseL.（购自新疆伊宁霍诚县）；阿里红FomesofficinalisAmes.（购自新疆维吾尔医院）；鹰嘴豆CicerarietinumL.（购自新疆维吾尔医院）；枸杞LyciumbarbarumL.（购自新疆中新药业公司）；肉苁蓉Cistanchesalsa.（采自新疆吉木萨盐生肉苁蓉人工栽培基地）；锁阳CynomoriumsongaricumRupr.（购自新疆乌鲁木齐市）；鼠尾草SalviadesertaSchang.（采自乌鲁木齐市近郊）。各药材分别用10倍量水煮提2次，过滤，合并滤液并减压浓缩，真空干燥后配

4、制成1mg/ml的水提液。1.2试剂EMDM培养基、无酚红EMDM培养基、17β-雌二醇、β-半乳糖苷酶、S.cerevisiac酵母菌株、SD培养基、Zymolase试剂（为Sigma公司产品），邻硝基苯-β-D-半乳吡喃糖苷（ONPG，日本和汉药研究所提供），胎牛血清（FBS，日本和汉药研究所提供），其余试剂均为日本产分析纯。1.3仪器电子读数分析天平(日本Shimaduz公司)；二氧化碳培养箱(日本SANYO公司),.freelpus)；台式高速低温离心机(美国BectonDickinson公司)；全温振荡培养基(美国BectonDickin

5、son公司)；BIO-RADModel3550-UV紫外分光光度仪(日本SANYO公司)；25mm2培养瓶、96孔培养板（美国BectonDickinson）。2方法与结果2.1细胞株及培养条件雌激素敏感的MCF-7人乳腺癌细胞由日本和汉药研究所提供。以含5%胎牛血清（Hyclone）的DMEM培养基培养传代。培养条件：37℃，5%CO2，相对湿度95%。2.2细胞增殖实验按E-screen法［3］并稍作修改，普通培养的MCF-7细胞经胰蛋白酶消化后以104个细胞/ml接种于96孔细胞培养板中，每孔100μl，贴壁24h后去除原培养基，换成实验用培

6、养基：无酚红的DMEM基加10%热灭活的无雌激素人血清，继续培养5d，此时加入阳性（雌二醇）对照组设10-13～10-9mol/L5个浓度，不同浓度的受试物和阴性（溶剂）对照组，每个浓度设6个复孔。6d后弃上清液，每孔加5mg/ml的四唑盐（MTT）30μl，继续培养4h。吸去孔中的培养液，每孔加入150μl的DMSO，在540nm波长测定吸光度并计算增殖率。结果见表1。阳性对照(雌二醇)从浓度10-13～10-9mol/L对MCF-7人乳腺癌细胞增殖力与对照组相比均有显著性,并在10-10mol/L组实验对MCF-7细胞增殖力最强,与其它各组相比

7、差异有显著性。说明本次实验结果是可靠的。在此实验条件下，高剂量组鹰嘴豆（P＜0.05）、石榴皮（P＜0.01）、罗勒（P＜0.05）、枸杞（P＜0.05）水提液与正常对照组均有显著性差异；在低剂量组鹰嘴豆（P＜0.01）、石榴皮（P＜0.01）、罗勒（P＜0.01）水提液与正常对照组相比有统计学意义；而鼠尾草、肉苁蓉、锁阳、阿里红、红景天水提液与正常对照组相比无统计学差异（P＞0.05）。2.3酵母菌株和培养基的建立过夜培养的酵母转种至新的SD液体培养基中，加入不同浓度的植物提取物，于30℃恒温振荡器中培养4h，然后在595nm测定吸光度。2.4β

8、-半乳糖苷酶活性的测定测定并记录培养液的OD595，离心，弃取上清液，加入Zymolase溶液，置37℃水浴中培养15mi