《基因工程制药综合实验》大纲 - 实验教学示范中心- 东北农业大学

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1、东北农业大学本科实验课程教学大纲实验课名称基因工程制药实验实验课英文名称VaccinologyComprehensiveExperiments一、理论课程（或实验课程）课号：09610043z适用专业：制药工程理论课程总学时：72实验总学时（周学时）：4学分：1.5开出实验个数：（验证实验0个；综合实验2个；设计实验1个；创新性实验1个）应开实验学期：第5学期二、实验课程简介现代生物技术是当期影响国民经济的四大科学支柱之一，而以基因工程药物为中心的医药生物技术则是生物技术领域中最为活跃、发展最为迅速的部分。基因工程药物是指利用基因工程技

2、术研制和生产药物，主要包括蛋白多肽药物、反义核苷酸、DNA药物和基因工程抗体等等。基因工程制药学实验是将基因工程制药的理论与实际融为一体并付诸实践的重要课程。本课程涵盖了从基因重组，克隆和表达的设计与构建，到基因工程菌的培养以及基因产物的分离纯化及分析过程，及最后的生物学活性评价。三、实验教学目标及基本要求要求学生有强烈的事业心，热爱制药工程专业，理论和实践相结合，更深入的理解和掌握基因工程药物的工程原理与技术。1．通过实验教学加强学生对基因工程药物的基本概念、制造原理、试验操作技术的理解与掌握。1452．通过实验教学使学生了解和掌握生

3、产蛋白多肽所用仪器的各种参数、适用范围以及使用方法。3．通过实验教学培养学生的动手能力，加强学生实验技能的训练，培养学生运用所学的理论知识解决生产实践中所遇到的实际问题。四、教材及主要参考书[1]《生物技术制药》张林生主编，出版社：科学出版社。（2008年第一版）.[2]《.现代生物制药工艺学》齐香君主编，出版社：化学工业出版社。（2004年第一版.）[3]《CURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGY》FrederickM..Ausubel主编.，出版社：JohnWilySons,Inc。（2006年.第一版）

4、[4]《生物技术制药》李德山主编，出版社：东北农业大学。（2007第一版）[5]《基因工程药物》李元主编，出版社：化学工业出版社。（2007第二版.）五、考核办法操作技巧，出勤率，实验态度，实验报告。大纲主撰人：李德山第一部分基因克隆（一）动物组织RNA的提取1．实验特点实验类型：综合实验类别：专业计划学时：4每组人数：5首开日期：2．实验目的与要求掌握的原则和要求，熟悉RNA的提取的制备过程。写出实验报告，叙述RNA的提取的原则与要点并附结果。3．主要仪器设备145序号主要仪器设备名称型号规格数量1高速冷冻离心机Beckman12高压

5、湿热灭菌器国产13温箱DHG-9240A14电泳仪国产15电泳槽国产66制冰机国产17提篮式液氮罐8凝胶成像系统4．实验内容提要实验过程：用液氮研磨肝脏，使肝脏细胞破碎。氯仿可除去杂蛋白，异丙醇可对RNA进行抽提，75%乙醇可脱去RNA中的盐类，对其进一步纯化。5．实验操作要点整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在冰上操作。并且整个操作要快速进行。6．注意事项Trizol有毒，要注意防护。（二）RT-PCR目的基因扩增1．实验特点实验类型：综合实验类别：专业计划学时：6每组人数：5首开日期：2．实验目的与要求145学习并掌握RT-PC

6、R法基因扩增的过程和要点。写出实验报告，记述RT-PCR法基因扩增步骤和操作要领。3．主要仪器设备序号主要仪器设备名称型号规格数量1水浴锅国产22高压湿热灭菌器YXQ-WF22DS-K13PCR仪国产14制冰机国产15电泳仪国产16电泳槽国产67凝胶成像系统4．实验内容提要将提取到的mRNA作为模板，加入引物，dNTP，反转录酶。从而反转录出cDNA。对反转录出的在特定引物存在下进行PCR，从而得到大量的扩增产物，及暨我们的目的基因。5．实验操作要点整个操作要带口罩及一次性手套，6．注意事项注意防止外界污染。（三）目的片断与载体的连接1

7、．实验特点实验类型：综合实验类别：专业基础计划学时：4每组人数：5145首开日期：2．实验目的与要求掌握质粒提取，核酸的酶切连接、PCR纯化及回收的操作基本过程。写出实验报告，简述上述操作要点。3．主要仪器设备序号主要仪器设备名称型号规格数量1水浴锅国产22高压湿热灭菌器YXQ-WF22DS-K13摇床国产14离心机国产 65电泳仪国产16电泳槽国产37凝胶成像系统4．实验内容提要将目的片断（PCR产物）及载体质粒用相应的限制性酶切割成粘性末端，通过胶回收纯化产物，并在连接酶的作用下将两者连为重组质粒。5．实验操作要点1、质粒和插入片断

8、纯度要好2、控制酶切和连接时间3、插入片断与载体之间的比例要控制好6．注意事项防止污染，注意紫外防护。145（四）感受态细胞的制备和转化1．实验特点实验类型：综合实验类别：专业计划学时：4每组人数：5首开日