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1、猪传染性胸膜肺炎血清学诊断方法研究进展2011第5期养猪SWINEPRODUCTION105猪传染性胸膜肺炎血清学诊断方法研究进展王斌(四川省畜牧科学研究院兽药研究所,四川成都610066)中图分类号:$858.285.1文献标志码:A文章编号:1002—1957(2011)05—0105—03摘要:猪传染性胸膜肺炎是国际上公认的危害现代养猪业的五大疾病之一.在我国,其血清阳性率呈上升趋势,研究快速,科学,准确的诊断方法对于本病的监测和控制具有很大的意义.本文就该病的血清学诊断技术研究进展作一综述,重点介绍ELISA检测方法
2、的进展.关键词:猪传染性胸膜肺炎;诊断;ELISA猪传染性胸膜肺炎(Porcinecontagiouspleuropn—eumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌ctinobacillusHeuropneumoniae,APP)引起的猪呼吸系统的一种严重接触性传染病.自Pattison1957年报道该病以来,英国,德国,瑞士,丹麦,澳大利亚,加拿大等国家均有发生,目前此病已呈世界性分布,给世界养猪业带来巨大损失【lJ.随着我国养猪业集约化程度的提高,从国外引进猪种的增加,该病也随之传入我国,其发生和流行目趋严重嘲.因此对P
3、CP进行快速,准确的诊断具有十分重大的意义,但是PCR,荧光抗体染色法等方法由于试验条件,人员能力等原因还不可能在基层广泛使用,血清学方法仍然是PCP诊断的主要手段.本文就该病目前的血清学诊断技术研究进展作一综述.1补体结合试验(ComplementFixationTest,CFr)CFI"是用来检测APP的最早的血清学方法,它由Nicolet于1971年建立后很快成为APP分型的标准方法.Gunnarss0nr3q979年比较全细胞抗原,高压处理抗原,混合抗原和酚水抗原在CFT上的效果发现,全细胞抗原同时具有种和型的特异性
4、,而酚水抗原型特异性最好.CFT的特异性比间接血凝试验(IHA)高,能够将副溶血性嗜血杆菌(Haemophilusparahaemoelyticus)与APP区别开;但敏感性低,而且有时会产生假阴性结果,加上操作复杂,只适合实验室应用,难以推广.2间接血凝试验(IndirectHemagg1ntinati0nAssay,IHA)1983年,Mittal等[41用盐浸,煮沸和高压处理3种方法提取APP抗原,建立了APP的IHA用于检测和分型,发现煮沸法获取的抗原在APP1型,3型,5型的检测中具有比盐浸法提取抗原更高的特异收稿
5、日期:201l-08—29作者简介:王斌(1981一),男,四川成都人,助理研究员,硕士,主要从事动物疾病的诊断和治疗.E—mail:binwang_555@163.corn性.APP2型与异源血清交叉反应严重,尤其是用高压处理的抗原更明显.不过它能将4型和7型分开,这是其它一些检测方法难以达到的.为克服交叉反应的问题,B1ackatl(1990)在应用本方法时,将待检血清按倍比稀释后,可消除大多数非特异性反应,但仍不能将APP一6和APP一8,APP一9和APP一11分开.我国逯忠新等同以APP超声波处理抗原和盐浸抗原致敏
6、绵羊红细胞,建立了IHA.超声波处理抗原具有种特异性,能与APP1～10型的高免兔血清发生阳性反应,与猪瘟,猪肺疫等类似症状疾病呈阴性反应.盐浸抗原具有型特异性,笔者用此法对我国4个省的APP血清型进行了调查,主要为2,3,7型.由于此方法操作简便,耗时少,目前已成为我国主要的检测和分型方法.3乳胶凝集试验(LatexAgglutinationTest,LAT)Mitui等1981年建立乳胶凝集法检测APP抗体,其特异性和敏感性与试管凝集试验,补体结合试验,琼脂扩散试验相当.不同血清型之间有较小的交叉反应,但异种血清无交叉反
7、应.1995年,Inzana~6]对LAT进行改进,以荚膜缺陷株对同型血清进行吸附,除去非荚膜抗体,从而得到纯度较高的荚膜抗体,包被乳胶颗粒,检测APP荚膜多糖.此法具有很高的特异性,与猪放线杆菌,猪巴氏杆菌,副猪嗜血杆菌无交叉反应,只与APP同型的的菌株反应.4琼脂扩散试验(GelImmunodiffusion,GID)Gunnarss0nn1979年以酚水法提取5个APP血清型的抗原建立APP的琼脂扩散试验表明,酚水抗原具有型特异性,与异种血清型无交叉反应.国内李开玉等阎报道用酚水抗原检测血清,特异性最高,但仍不能区分血
8、清型1和9,血清型3,6和8.不同血清型之间的交叉反应可通过菌体吸收法除去.该法耗时较长,但操作简便,试剂易得,结果判定简单,适宜基层应用.106养猪SWINEPRODUCTION(5)20115酶联免疫吸附试验(enzyme—linkedimmunosobentassay,ELISA)5
