姜黄素、姜黄素与大黄素联用抗肝纤维化作用的实验研究论文

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1、姜黄素、姜黄素与大黄素联用抗肝纤维化作用的实验研究论文【摘要】目的探讨姜黄素、姜黄素与大黄素联用的抗肝纤维化作用。方法以二甲基亚硝胺（DMN）诱导大鼠肝纤维化模型，造模结束后，分别给予姜黄素、姜黄素与大黄素联用（简称姜大联用）进行治疗，检测肝功能、肝纤维化血清学指标，肝组织SOD、MDA和Hyp水平，取肝组织固定，HE、VG胶原染色，光镜观察肝组织的病理变化以及α-平滑肌（α-SMA）在肝脏的表达。结果姜黄素、姜大联用能明显降低肝纤维化大鼠血清ALT.freelin）、大黄素（Emodin），均购自陕西旭煌植物科技有限公司，经HPLC检测纯度达90%以上，使用前

2、用0.5%羧甲基纤维素钠配制成不同浓度的混悬液。水飞蓟素（Silymarin，利加隆140胶囊），德国马博士大药厂生产，临用时用蒸馏水配成2.4mg/ml的供试品液。1.3试剂DMN购自日本株式会社，使用前用生理盐水配成0.5%溶液备用。HA，LN，PCIII由北京北方生物技术研究所提供；TNF-α测试盒由北方生物试剂研究所提供；SOD，MDA，Hyp，考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。甲醛、苏木素、伊红、酸性品红、戊二醛等。1.4仪器7060型全自动生化分析仪、SN-695B型放免γ测量仪，上海原子核研究所日环仪器厂。UV-754型分光光度

3、计，BX50显微镜，Olympus公司，2035石蜡切片机，德国N原液溶于200ml生理盐水中，配制0.5%DMN溶液，避光保存，2周内使用。参照文献［2］给药，每只大鼠给予0.5%DMN（2ml/kg）腹腔注射，第1周前3d连续给2/3药量，后4d不给药，第2周开始前3d连续给全药量，后4天不给药，持续4周。正常对照组则给予相同量的生理盐水腹腔注射。造模结束后，将存活的大鼠随机分为6组，分别为模型对照组、水飞蓟素组、姜黄素高、低剂量组和姜大联用高、低剂量组,每组8只。正常对照组和模型对照组灌胃蒸馏水，水飞蓟素组用药量分别为人临床剂量的5倍，即0.024g/kg

4、，姜黄素给药剂量为100mg/kg和200mg/kg，姜大联用剂量分别为50，10和100，20mg/kg。灌胃1次/d，每周灌6d。治疗4周后，实验结束。眼眶采血，分离血清，留取肝左叶固定。2.2观察指标及方法①观察大鼠一般状态包括：饮食变化、行为及毛发改变等；②全自动生化分析仪检测大鼠血清ALT，AST，TP，ALB，A/G；③放免法检测HA，LN，PCIII，TNF-α含量；④肝组织标本HE和VG胶原染色，光镜观察；⑤α-SMA免疫组化染色：常规SABC法染色，DAB显色。2.3肝胶原增生程度、肝纤维化分级采用Ishak法［3］0级：无肝纤维化；1级：纤维

5、组织向部分汇管区扩大，伴有小纤维间隔；2级：纤维组织向大部分汇管区扩大，并伴有小纤维间隔；3级：纤维组织向汇管区扩大，并伴汇管区与汇管区桥接；4级：纤维组织向汇管区延伸，并有明显的汇管区与汇管区、汇管区与中央小叶区桥接；5级：纤维形成明显的汇管区与汇管区、汇管区与中央小叶区桥接，间或有假小叶形成；6级：肝内布满小圆形假小叶，假小叶内有粗大增生的胶原纤维（肝硬化）。2.4统计方法计量资料以均数±标准差±s表示，采用F检验，两两比较用q检验，用统计软件SPSS11.0进行分析；计数资料采用Ridit分析。3结果3.1姜黄素、姜大联用对大鼠一般情况的影响正常对照组大鼠

6、生长状态良好，体重增加显著，皮毛光滑，二便如常；大鼠注射DMN后，活动少，精神萎靡，喜睡少动，体重不增加甚至较前下降，尿黄，有腹泻，大鼠发生腹水产生率达70%。经姜黄素、姜大联用治疗后大鼠一般状态明显好于模型组，腹水的发生率明显降低。3.2姜黄素、姜大联用对肝纤维化大鼠血清ALT，AST，TP，ALB，A/G的影响结果如表1。从表1可以看出，经DMN造模后，大鼠血清中ALT、AST的含量升高，TP，ALB，A/G的含量明显下降，与正常对照组比较均差异显著（P0.01）；经姜黄素、姜大联用治疗后，各组大鼠血清中ALT及AST的水平有不同程度降低，TP、ALB、A/

7、G均有升高，与模型组比较有显著性差异（P0.05或P0.01），且存在一定的量-效关系。3.3姜黄素、姜大联用对肝纤维化大鼠血清PCIII，HA及LN，TNF-α含量的影响结果见表2。表1姜黄素、姜大联用对肝纤维化大鼠血清ALT，AST，TP，ALB及A/G的影响（略）与正常对照组比较，**P0.01；与模型组比较，ΔP0.05,ΔΔP0.01；n=8表2姜黄素、姜大联用对大鼠血清PCIII，HA，LN，TNF-α含量的影响（略）与正常对照组比较，**P0.01；与模型组比较，ΔP0.05,ΔΔP0.01；n=8从表2可以看出，使用DMN造模后，各组大鼠血清中H

8、A，LN，PCIII，T