中药天年饮对衰老大鼠睾丸生精细胞凋亡及相关因素的影响论文

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1、中药天年饮对衰老大鼠睾丸生精细胞凋亡及相关因素的影响论文杜金凯，李艳，陈志宏，薛景凤【关键词】天年饮；,,衰老；,,生精细胞；,,凋亡；,,睾酮；,,p53基因摘要：目的研究中药天年饮对衰老大鼠睾丸生精细胞凋亡及相关因素的影响。方法40只SD大鼠随机分为4组，正常组、衰老模型组、天年饮用药组及阴性对照组，每组均为10只。D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老的大鼠模型。采用ELISA方法检测各组大鼠血清睾酮含量、SP免疫组化法检测睾丸生精细胞p53蛋白的表达情况、TUNEL法检测各组大鼠睾丸生精细胞的凋亡情况。结果衰老大鼠血清睾酮含量明显降低（模型组与正常组比较：P0.0

2、5），衰老大鼠睾丸p53阳性细胞率及凋亡指数明显高于正常大鼠（P0.01）。天年饮用药组大鼠血清睾酮含量较衰老大鼠明显升高（P0.05），天年饮用药组大鼠睾丸p53阳性细胞率及凋亡指数较衰老大鼠明显降低（P0.05.freeledicineTiannianyinonapoptosisandrelatedfactorsofspermatogeniccellsintestisofagingrats.Methods40SDrats:normalgroup,agingmodelgroup,Tiannianyingroup,.freelodelratsadebyinjecting

3、D-galintoabdominalcavitycontinuously.ELISA,SPimmunohistochemistrytoobservethep53expressionandTUNELtodetectapoptosisofspermatogeniccellsintestis.ResultsThetestosteronecontentinserumofagingratsdecreasedsignificantlyparedalrats(P0.05);thep53positivecellsandapoptoticindexofagingratsuchhigher

4、thanthoseinnormalrats(P0.01).Tiannianyincouldinhibitthedecreaseoftestosteronecontentinserumsignificantly(Tiannianyingroupparedodelgroup:P0.05),anddecreasethep53expressionandapoptoticindexsignificantly(P0.05,P0.01).ConclusionTraditionalChinesemedicineTiannianyincanimprovethespermatogenicf

5、unctionofagingrats,andhasfairlyanti-agingeffects.Keyatogeniccell;Apoptosis;Testosterone;p53gene抗衰老是一个古老的话题，目前国内、外应用的抗衰老方法有很多。中药延缓衰老作用的研究已逐渐深入，在细胞传代、寿命实验、免疫内分泌代谢等领域进行了多方面的研究，揭示了不少药物的抗衰老机理，但各自研究的方面不同。天年饮由刘河间《宣明论方》何首乌丸加味而成，由何首乌、肉苁蓉、怀牛膝等组成，具有补肝肾、益精血、延年益寿之功效。本研究采用D-半乳糖致亚急性衰老的大鼠模型，观察天年饮对睾丸生精细胞

6、凋亡及相关因素的影响，探讨天年饮延缓衰老的作用机制。1材料与方法1.1动物的选择及分组成年雄性SD大鼠40只，体重180~250g（由河北医科大学实验动物中心提供，合格证书：医动字第04057号）。将大鼠随机分为4组，正常组、衰老模型组、天年饮用药组和阴性对照组，每组10只。其中模型组、用药组、阴性对照组均采用D-半乳糖连续腹腔注射（按200mgkg1-d-1给药，1次/d，连续40d）制作亚急性衰老大鼠模型。模型组大鼠造模成功后不再做任何处理；用药组大鼠造模成功后每天用天年饮灌胃，共30d；阴性对照组大鼠在造模成功后灌胃同等剂量的生理盐水，时间同用药组大鼠。1.2药品

7、与试剂D-半乳糖(D-gal)由北京化学试剂公司生产(批号020402)。天年饮由炙何首乌、怀牛膝、肉从蓉、淫羊藿、丹参、茯苓等六味中药组成，经熬制后每毫升含生药1.5g灌胃。检测血清睾酮含量的ELISA试剂盒及免疫组化、凋亡试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。1.3指标检测1.3.1血清睾酮含量的检测大鼠经内眦取血，离心取上清，采用ELISA方法检测睾酮含量。1.3.2p53表达的检测及定量数据处理大鼠腹腔注射戊巴比妥麻醉，4%多聚甲醛灌注固定，取双侧睾丸，后固定过夜，常规石蜡包埋、切片，片厚5μm，按试剂盒说明以SP免疫组化法检测p