局灶性脑缺血再灌注损伤后杏仁核和海马环氧酶、脂氧酶及核因子κb的表达论文

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1、局灶性脑缺血再灌注损伤后杏仁核和海马环氧酶、脂氧酶及核因子κB的表达论文【摘要】目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(CIRI)后杏仁核和海马环氧酶2(COX2)、5脂氧酶(5LO)和核因子κB(NFκB)的表达情况,探讨其损伤机制。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞2h/再灌注24h模型。免疫组织化学法检测杏仁核和海马COX2、5LO和NFκB蛋白表达,计数COX2、5LO和NFκB阳性细胞数,MoticImagesAdvanced3.0图像分析系统作半定量分析。结果CIRI后大鼠杏仁核和

2、海马COX2、5LO和NFκB阳性细胞计数明显增高(P0.001),平均灰度值显著下降,表达增强(P0.001)。结论CIRI后大鼠杏仁核和海马区域的COX2、5LO和NFκB表达增强,继而引发后续反应,介导神经损伤。【关键词】脑缺血再灌注损伤杏仁核海马环氧水解酶类杏仁核和海马是边缘系统的重要核团,它们之间不仅解剖位置紧临,其关系也很密切。目前对海马在脑缺血再灌注损伤(cerebralischemiareperfusioninjury,CIRI)中神经细胞的凋亡情况已有报道1。本课题组既往的研究表明,

3、局灶性CIRI后大鼠杏仁核出现缺血坏死、水肿,正常锥体神经元密度减少2,.freelpus公司);MoticImagesAdvanced3.0图像分析系统(香港麦克奥迪公司);5LO、COX2、NFκB兔抗大鼠单克隆抗体(美国Cayman公司);SABC兔IgG免疫组织化学试剂盒、DAB显色试剂盒(武汉Boster公司);枸橼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液(北京中山生物技术有限公司);其余试剂均为国产分析纯。1.2方法1.2.1模型制备SD大鼠随机分假手术组和模型组。模型组参照文献3线栓法制备右侧大脑中动脉栓塞

4、/再灌注(middlecerebralarteryocclusion/reperfusion,MCAO/R)模型,假手术组不插入栓线,其他手术操作相同。1.2.2标本制作缺血2h/再灌注24h时,迅速断头取脑,去除小脑及嗅球,取视交叉至漏斗柄的脑片置于4%甲醛溶液中固定1周,常规脱水、透明、浸蜡、包埋,冠状切片5μm,贴于多聚赖氨酸处理的载玻片上,免疫组织化学染色,观察各指标。1.2.3COX2、5LO和NFκB蛋白在杏仁核和海马的表达免疫组织化学SABC法分别检测损伤侧杏仁核和海马COX2、5LO和N

5、FκB的蛋白表达,均按试剂盒说明书逐项操作,室温显色。于10×40视野下随机选取相应区域5个不重叠视野进行阳性细胞计数,COX2、5LO阳性细胞的细胞质呈棕黄色,核淡染;NFκB阳性细胞的细胞质呈棕黄色,核深染。应用MoticImagesAdvanced3.0图像分析系统行半定量分析,计算阳性细胞的平均灰度值。1.3统计学处理采用SPSS13.0软件进行统计分析,实验数据以x±s表示,各参数间的比较采用t检验。2结果A:假手术组;B:杏仁核;C:海马.COX2:环氧酶2；5LO：5脂氧酶；NFκ

6、B：核因子κB.图1损伤侧杏仁核和海马环氧酶2、5脂氧酶和核因子κB蛋白的表达(×400)Fig1ThechangesofCOX2,5LOandNFκBproteinsinamygdaleandhippocampusoftheinjuredbraintissue(×400)2.1COX2的表达假手术组脑组织基本没有COX2阳性细胞的表达,杏仁核和海马未见阳性细胞表达;模型组杏仁核和海马见大量COX2阳性细胞(图1),杏仁核区阳性细胞为(28.8±3.2),海马区为(30.4±2.9),且平均灰

7、度值均明显下降,提示模型组杏仁核和海马COX2的表达增强(P0.001,图2,3)。2.25LO的表达假手术组脑组织仅有少量5LO阳性细胞表达,杏仁核和海马未见阳性细胞表达;模型组杏仁核区阳性细胞为(30.7±3.0),海马区为(32.8±3.5),两区域阳性细胞表达数明显增多(P0.001,图1),平均灰度值下降,5LO表达增强(图2,3)。2.3NFκB的表达假手术组脑组织与杏仁核和海马区域仅见少量NFκB阳性细胞;模型组杏仁核区阳性细胞为(27.9±1.3),海马区为(25.4±0.9),两核团

8、阳性细胞数明显增多(P0.001,图1),平均灰度值下降,NFκB表达增强(图2,3)。COX2:环氧酶2；5LO：5脂氧酶；NFκB：核因子κB.与假手术组比较,☆:P0.001.图2杏仁核环氧酶2、5脂氧酶和核因子κB蛋白表达的比较Fig2ThechangesoftheexpressionofCOX2,5LOandNFκBproteinsin