汉族人群聚腺苷二磷酸核糖聚合酶论文

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1、汉族人群聚腺苷二磷酸核糖聚合酶论文梁海荣，唐焕文，胡大林，庄志雄【关键词】苷二磷酸核【摘要】目的：通过检测人聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（hPARP1）7个外显子核苷酸多态性，了解在广东的汉族人群中hPARP1基因多态性分布，为建立民族特色的DNA修复基因多态性数据提供基础资料。方法：选取在广东地区的汉族健康人群320名的基础资料及血液样本，抽提血液DNA，用PCR法扩增hPARP1基因7个外显子.freelorphismsanddistributionsofsevenexonsinhumanpoly(ADPribo

2、se)polymerase1(PARP1)geneandtocontributetotheconstructionofthespecialDNArepairgenepolymorphismsdatabank.Methods:Thebasicmaterialsandbloodsamplesfrom320GuangdonghealthHanpopulationorphismofexon3,11,12,13,16,17andexon20ofhPARP1geneed.Results:Apolymorphismsofexo

3、n20ofPARP1genealbandstheanalysisofPCRSSCPinotherexons.Also,DNAsequenceofnormalbandsturnedoutthatPCRproductsutations(T→C)and(G→A)orphismsmayexistinexon17andintron12ofhPARP1geneinGuangdongHanpopulation.PCRSSCPsilverstainingcouldbeasatooltoscreenrapidlythepolymo

4、rphismshPARP1gene.【Keyerase1;geicpolymorphism;polymerasechainreactionDNA修复系统在修复DNA损伤、维持基因组完整和稳定性中起着不容忽视的作用。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1［poly(ADPribose)polymerase1，PARP1］是真核细胞中存在的一种蛋白质翻译后修饰酶。可参与许多与细胞功能有关的重要反应，并与癌症的发生、发展和治疗、预后密切相关，对维持DNA的完整性方面起着重要的作用［1］，其多态位点的确认对疾病易感性的流行病学研究具有

5、重大意义。基因检测能有效筛查基因突变携带者，可以为进一步鉴定该突变功能上的意义提供基础的分子遗传学资料，因而具有重要的意义。本文应用PCRSSCP基因筛查技术和分子流行病学方法检测了在广东的汉族人群中正常人hPARP1基因的多态性，为hPARP1基因多态性人群分布和建立民族特色的DNA修复基因多态性数据库提供基础资料。现将结果报道如下。1方法1.1样本收集选取在广东地区的健康状况良好(通过体检选择取)、无家族史和遗传病史、三代及以上均为汉族的320名个体（其中男174例，女146例，年龄38～67岁，平均年龄（4

6、3.15±6.70）岁）并取血样标本。1.2血液DNA的抽提［2］采集外周抗凝全血5mL，用经典酚氯仿法提取外周血DNA，并在4℃保存。1.3引物设计根据已确定的hPARP1基因cDNA和内含子/外显子连接序列，用PrimerPremier5.0引物设计软件设计hPARP1基因7个外显子的引物，该引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成(表1)。表1扩增hPARP1基因外显子的引物序列1.4PCR扩增PCR反应总体积为25μL，各成分终浓度为：引物0.125μmol/L，dNTP0.2mmol/L，Mg2+1.

7、8mmol/L，DNA模板25～250ng，TaqDNA聚合酶2.5u。反应参数为：98℃预变性5min，94℃30s，53～59℃30s，72℃45s，30次循环后72℃延伸8min。以2％琼脂凝胶对扩增产物进行鉴定。若与DNA分子量标准相比，扩增产物大小一致，无杂带，则可用于单链构象多态性(SSCP)分析。1.5SSCP分析1.5.18％聚丙烯酰胺凝胶的配制40％丙烯酰胺8mL，10×Tris/硼酸电泳缓冲液(TBE)4ml，10％过硫酸胺（AP）0.8mL，N,N,N′,N′四甲基乙二胺(TEMED)53μ

8、L，甘油4mL，加水至40mL。将聚丙烯酰胺凝胶混合物倒入玻璃板夹层，插入梳子，让凝胶在室温下聚合40～50min，拔出梳子，冲洗样孔。根据PCR产物的浓度，取0.2～2μL产物加入20μL甲酰胺变性液（98％去离子甲酰胺，0.05%溴酚蓝和0.05%二甲苯青）中混匀，95℃热变性5min，立即置于冰上，点样于预电泳30min的上述8％聚丙烯酰胺凝胶中，在4～8℃环境中3