瘦素及其受体在椎间盘组织的表达及意义论文

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1、瘦素及其受体在椎间盘组织的表达及意义论文【摘要】目的探讨瘦素及其受体在椎间盘组织表达及意义。方法采用免疫组织化学技术检测正常椎间盘(21个)与退变椎间盘(39个)组织中瘦素及其受体的表达，用免疫细胞化学技术检测体外培养的纤维环细胞中瘦素及其受体的表达。结果退变椎间盘组织中瘦素及其受体的表达高于正常椎间盘组织，差异有显著性(t=3.223、5.553,P0.05)。体外培养的纤维环细胞中可以检测到瘦素及其受体表达。结论椎间盘组织存在瘦素及其受体;瘦素可能在椎间盘退变中发挥作用。【关键词】瘦素;椎间盘;免疫组织化学ABSTRACTObjectiveTostudytheexpre

2、ssionsandtheirsignificanceofleptinandleptinreceptorinintervertebraldisc.MethodsExpressionsofleptinanditsreceptorproteinalintervertebraldiscsand39degenerativediscs,andinhumancellsofannularfibrosusculturedinvitro,immunohistochemicallyandimmunocytochemically,respectively.ResultsTheexpressions

3、ofleptinanditsreceptorindegenerativediscsaldiscs(t=3.223,5.553;P0.05),andthatexpressionscouldalsobedeterminedinthecellsculturedinvitro.ConclusionLeptinandleptinreceptorexistintheintervertebraldisctissue,ightplayanimportantroleintheprocessofthediscdegeneration.KEYRI显示所取的椎间盘组织T2加权像Pfirrmann分

4、级Ⅳ～Ⅴ级;②术前存在明显神经根刺激症状。各标本取出后置于40g/L甲醛溶液中固定,.freel厚连续切片,以备苏木精伊红染色和免疫组化检测用。1.2方法1.2.1切片光镜观察用苏木精伊红常规染色。1.2.2免疫组织化学染色瘦素兔抗人多克隆抗体和瘦素受体羊抗人多克隆抗体购自SantaCruze公司;ImmunostainSPKit试剂盒和DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。载玻片均经多聚赖氨酸浸泡24h防脱片处理,60℃烤箱烘烤干燥。切片常规进行脱蜡、阻断内源性过氧化酶的活性、抗原修复和封闭，采用SP法进行免疫组织化学染色，DAB显色。实验中采用PBS代替一抗

5、作为阴性对照，以脂肪组织的染色结果作为阳性对照。结果判定：瘦索及其受体表达阳性物质位于细胞内，阳性结果为棕黄色。每张切片随机选取纤维环区域10个高倍镜视野，计数每个视野的阳性细胞数，再将10个高倍镜视野细胞数相加，得出每个样本阳性纤维环细胞数。1.2.3纤维环细胞培养椎间盘标本取自25岁男性腰椎间盘突出症病人，在离体30min内取回实验室。仔细分离出纤维环组织，把纤维环组织剪成1mm大小的碎块，用胰蛋白酶及胶原酶消化后，细胞用HAMF12培养液冲洗3次，低速离心5min，计数板进行细胞计数。将细胞接种于培养瓶内，置于培养箱中进行培养。细胞爬片行苏木精伊红染色，见细胞为梭

6、形或多角形，胞核卵圆形，胞浆淡染。然后进行瘦素检测：40g/L多聚甲醛固定10min;PBS冲洗3次，每次3～5min;2g/LTritonX100透化，室温5min;PBS冲洗3次，每次3～5min;封闭液阻断，室温60min;PBS冲洗3次，每次3～5min;滴加兔抗人瘦素一抗，37℃1h;PBS冲洗3次，每次3～5min;滴加山羊抗兔IgG抗体，37℃30min;PBS冲洗3次，每次3～5min;滴加HRP，37℃30min;PBS冲洗3次，每次3～5min;DAB显色15min，封片，观察。同法检测瘦素受体。1.3统计学处理所测数据采用±s表示,以微软公司Exce

7、l2000Studenttest作样本均数t检验,P0.05表示差异有统计学意义。2结果2.1苏木精伊红染色退变组椎间盘组织表现为胶原纤维增多，排列紊乱，血管组织浸润，纤维环板层状结构破坏，肉芽组织形成。正常组均表现为纤维环板层状结构明显，软骨细胞多见，且较均匀，基质较少。2.2瘦素及其受体在椎间盘组织表达正常椎间盘组织，瘦素在纤维环中表达较均匀，从纤维环外层向内层表达逐渐减弱，而在髓核的软骨样细胞中无表达;退变椎间盘纤维环细胞中瘦素表达增强，且不均匀，以细胞簇及纤维软骨细胞增生的区域明显，髓核细胞无表达。瘦素受