一种简便的病原真菌单孢分离方法研究

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1、玉米科学2010，18(1)：126～127，134JournalofMaizeSciences文章编号：1005-0906(2010)01-0126-02一种简便的病原真菌单孢分离方法研究龚国淑，徐琴，张敏，杨继芝，陈华保，申世安，唐太飞(四川农业大学农学院，四川雅安625014)摘要：研究一种简便、实用、高效的病原真菌单孢分离法———挑针转移法，即用尖细而光滑的挑针从培养物或标样上挑取孢子，将其转移到清水琼脂块上，然后挑取分散的单个孢子转移到另一琼脂块上获得单孢。通过对多种真菌的分离表明，该法操作简便，成功率可达9

2、0%以上。关键词：玉米病害；病原真菌；单孢分离；挑针转移法中图分类号：S435.131文献标识码：AASimpleMethodforSingleFungalSporeIsolationGONGGuo-shu,XUQin,ZHANGMin,YANGJi-zhi,etal.(AgriculturalCollegeofSichuanAgriculturalUniversity,Ya’an625014,China)Abstract:Thispaperpresentedamethodtoisolatesinglefungalsp

3、ore_dissectneedleremovingsporemethod.Sporeswereremoveddirectlyfromcultureordiseasesampleusingsterilizeddissectneedleandplacedinwateragarpiece.Singlesporethenwaspickedandremovedtonextwateragarpiece.Finally,wateragarpiececontainingsinglesporewerecultureduntilspore

4、reachedaclearcolony.Themethodwassimple,convenientandpracticalonfungidis-easeresearch.Thewholeisolationprocedureonlyinvolvedinsomesimpleinstrumentsandsuccesspercentagecouldreach90toobtainsinglespore.Keywords:Maizedisease;Pathogenicfungi;Singlesporeisolation;Disse

5、ctneedleremovingsporemethod[5，6]真菌病害研究中常会涉及到病原菌的纯培养问挑取，培养皿不能固定，也不能随意移动。如果需[7]题，尤其在研究病原菌群体遗传特征时总会用到单要制作特殊的用具，如玻璃针、眉毛挑针，制作较麻孢分离技术。单孢分离法较多，主要依据各实验室的烦，在使用过程中不能随时灭菌。在病原真菌分离纯设备和使用习惯，有些方法相当繁琐。评价一种方法化中试用了不同的单孢分离法，并改良出一种简便的优劣关键看操作难易度、成功率高低以及适用范易行、成功率高的分离法，该方法不仅适宜从菌落中[1]围

6、等。如采用切取器分离法，制作和安装切取器较挑取单孢，还适宜从病部甚至被杂菌混杂的材料中麻烦，且不好操作；采用玻璃针挑取法，用具制作繁获得单孢。[2]琐，操作不方便；琼脂平板切割纯化法，则要在单孢1材料与方法处作上记号，然后切割单孢琼脂块，切割的范围不好控制，邻近的孢子陷入缝隙中不易发现，难保证单孢1.1材料及用具[3，4]1.1.1病害标样子。直接将涂有孢子的琼脂平板放置在显微镜下玉米弯孢菌叶斑病(Curcularialunata)、灰斑病(Cercosporazeae-maydis)、大斑病(Exserohilumt

7、urci－收稿日期：2009-01-22；修回日期：2010-01-06cum)、小斑病(Bipolarismaydis)。每种病害提供20份基金项目：国家现代玉米产业技术体系、四川玉米创新团队、四川省来源不同的材料。教育厅重点项目(08ZA0800)、2009年雅安市科技局项目、1.1.2新鲜培养物四川省应用基础项目(03JY029-033-1)、四川农业大学校新月弯孢菌(Curcularialunata)、玉蜀黍尾孢菌科技基金(1301)作者简介：龚国淑(1964-)，女，四川泸县人，博士，教授，博士生导(Cerc

8、osporazeae-maydis)、大斑突脐蠕孢(Exserohilum师，主要从事植物病理学和微生物生态学方面的相关研turcicum)、玉蜀黍平脐蠕孢(Bipolarismaydis)。每种病究。Tel：0835-2882320E-mail：guoshugong@126.com原菌提供20个来源不同的组织块分离物。1期龚国淑