生物技术制药完整

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1、第一章生物技术：以生命科学为基础，利用生物体（或生物组织、细胞及其组分）的特性和功能，设计构建具有预期性状的新物种或新品系，并与工程学相结合，利用这样的新物种（或品系）进行加工生产，为社会提供商品和服务的一个综合性的技术体系。生物技术制药：采用现代生物技术人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品，称为生物技术制药。第二章：基因工程技术：将所要重组对象的目的基因插入载体、拼接、转入新的宿主细胞，构建成工程菌（或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。补料

2、分批培养：将种子接入发酵反应器中进行培养，经过一段时间，间歇或连续地补加新鲜培养基，使菌体进一步生长的培养方法。连续培养：将种子接入发酵反应器中，搅拌培养至菌体浓度达到一定程度后，开动进料和出料蠕动泵，以一定稀释率进行不间断培养。透析培养：透析培养技术是利用膜的半透性原理使培养物和培养基分离，其主要目的是通过去除培养液中的代谢产物来解除其对生产菌的不利影响。高密度发酵：是指培养液中菌体的浓度在50gDCW/L以上，目的是降低成本，提高效率。离子交换层析：离子交换层析是以离子交换机为固定相，依据流动相中的组分离子

3、与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。疏水层析：利用蛋白质表面的疏水区域和固定相上疏水基团之间的相互作用力差异，对蛋白组分进行分离的层析方法。亲和层析：亲和层析是利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的，又是可逆的，改变条件可以使结合解除。如抗体与抗原、激素与受体、酶与底物或抑制剂之间的作用。凝胶过滤层析：凝胶过滤层析是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相层析方法。基因工程技术生产药品的优点：1.利用基因工程

4、技术可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（胰岛素、干扰素、细胞因子等），为临床使用建立有效的保障。2.可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围。3.利用基因工程可以发现挖掘更多的内源性生理活性物质。4.内源生理活性物质在作为药物使用时，存在不足之处，可以通过基因工程和蛋白质工程对其进行改造。5.利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。基因工程药物制造主要步骤：1.目的基因的克隆，构建DNA重组体，构建工程菌，目的基因的表达，外源基因表达

5、产物的分离纯化，产品的检验。化学合成目的基因的先决条件：必须已知其核苷酸排列顺序，或者已知其蛋白质的氨基酸顺序，再按相应的密码子推导出DNA的核苷酸序列。人工合成基因的限制：1.不能合成太长的基因。2.人工合成基因时，遗传密码的简并性会为选择密码子带来很大困难，当以氨基酸顺序推测核苷酸序列时，不一定与天然基因完全一致，已造成中性突变。3.费用较高。基因工程宿主菌应满足条件：1.具有高浓度、高产量、高产率；能利用易得廉价原料；不致病、不产生内毒素；发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；容易进行代谢调控；容易

6、进行重组DNA技术；产物容易提取纯化。目前应用最广泛的宿主菌:大肠杆菌。表达载体需具备的条件：载体能够独立地复制；应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选；具有很强的启动子。能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别；有阻遏子，是启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录；有很强的终止子，以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因，而不转录其他无关的基因，同时很强的终止子所产生的ｍＲＮＡ较为稳定。真核基因在大肠杆菌中的表达形式：1.以融合蛋白的形式表达药物基因。2.以非融合蛋白的形式表达药物

7、基因。3.分泌型表达蛋白药物基因。表达用的酵母菌应满足的条件：1.菌体生长力要强。2.菌体内源蛋白酶要较弱。3.菌株性能要稳定。4.分泌能力要强。基因工程在发酵过程中对发酵罐的要求：1.要提供菌体生长的最适条件。2.培养过程不得污染、保证纯菌培养。3.培养及消毒过程中不得游离出异物，不能干扰细菌代谢活动。离子交换层析原理：离子交换剂由三部分组成：①不溶性的惰性高分子聚合物基质，也被称为载体②共价键结合于载体上的不能移动的荷电基团，称为活性基团或功能基团③与活性基团以离子键连接的活性离子，带有与活性基团相反的电荷

8、，又称为平衡离子或反离子。疏水层析原理：蛋白质表面多由亲水基团组成，也有一些疏水性较强的疏水区。在高盐浓度时，蛋白质表面疏水部位的水化层被破坏，暴露出疏水部位，疏水作用增强，与固定相上的疏水基团产生疏水性作用而被吸附；盐浓度降低时蛋白质疏水作用减弱，目的蛋白质被逐步洗脱下来。亲和层析原理：通过将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶性基质（也称载体）上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，