高效液相色谱法测水溶性维生素综述

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1、高效液相色谱法测水溶性维生素综述王海霞（扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009）摘要：高效液相色谱是一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。本文综述了用高效液相色谱法测定水溶性维生素含量的方法，列举了烟酸和维生素C的测定过程，对仪器的保养也作了部分介绍。关键词：高效液相色谱水溶性维生素烟酸维生素C高效液相色谱(HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC)是近30年发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。它既能用于微量组分的分析测定，又能用于大量的制备分离，灵活多样，其应用

2、范围已超过其他各种分离方法，尤其在生化医药样品的分析分离方面更充分发挥它的特长，为推动该领域的进步和发展作出了巨大贡献[1]。高效液相色谱系统是由储液器、泵、进样器、分离柱、检测器、数据处理系统等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入进样系统或进样器。样品通过进样器以精确的体积插入流动相中,再被流动相带到柱内,分离过程在柱内进行,被分离成单个组分的样品依次从柱内流出,通过检测器样品浓度被转变成电信号送到记录器和数据系统,经系统处理,数据以图谱和图表形式打印出来[2，3]。对HPLC技术及设备原理了解了,这样就能够提高仪器的利用率,更好地发挥仪器

3、作用[4，5，6]。维生素为维持生物体正常机能的必需物质,常作为营养强化食品的添加因子,它广泛存在于谷类、果蔬、肉禽及蛋类等加工品中,因此,维生素的检测对食品[7，8，9]、饮料[10，11]、制药[12]、饲料[13]等领域都有非常重要的意义。水溶性维生素与人体的生长发育及健康密切相关。水溶性维生素中又以维生素C及B族维生素较为重要[14]。水溶性维生素的测定方法主要包括分光光度法、分子荧光法、微生物法和高效液相色谱法等。分光光度法的样品前处理一般较复杂，且干扰物质多，测定结果偏高；分子荧光法的样品预处理也很复杂，在对多维片和维生素强化食品进行

4、多种维生素的检测时；会给定量带来一定的困难；而用高效液相色谱法测定水溶性维生素，样品前处理简单,样品用量少，分离速度快，可一次性分析多种水溶性维生素。目前,国内用高效液相色谱法分析水溶性维生素时，一般使用Water公司专制的PICB离子对试剂，其价格昂贵且不易保存[15]。目前，多种水溶性维生素的色谱分离条件有离子对HPLC、胶束HPLC和非离子对HPLC[16，17，18]，前者因离子对试剂价格昂贵，且对色谱柱柱效及泵损害大，不适合作为常规分析方法[19]。HPLC应用于水溶性维生素的分析,目前多为纯方法研究或仅用于药物和一些基本样品的分析。应

5、用于食品,尤其是植物机体,同时测定多种水溶性维生素的方法很少[20]。1.复合预混合饲料中维生素B族的测定目前复合预混料中都添加有多种维生素,因为动物都具有潜伏的维生素不足症,这些潜伏的维生素不足症不能观察出来,但在不利环境条件下便可立即诱发并显示出缺乏症来。如果动物完全缺少一种或数种维生素,或者是摄入量不足,某些代谢过程就将受到损害,从而导致生长受阻或者疾病。现就复合预混合饲料中维生素B1、B2、37检测分析湖南饲料2007年第1期B6、B5(烟酸、烟酰胺)、B12(叶酸)的测定方法进行探讨。根据GB14700-93饲料中维生素B1[21]的测

6、定方法、GB14701-93饲料中维生素B2[22，23]的测定方法、GB14702-93饲料中维生素B6[24]的测定方法,对B1、B2、B6进行测定。VB1、VB2、VB6是利用荧光分光光度计,采用使维生素经提取后形成荧光色素,在一定波长下所产生的荧光强度与试样中维生素的含量成正比,进行定量测定。GB/T17813-1999饲料中烟酸、叶酸[25，26，27]的测定是采用高效液相色谱法进行测定的，由于上述5种B族维生素的前处理方法均各不相同，尤其荧光法测定操作步骤繁琐,检测误差较大，在查阅国内外文献的基础上，参考《饲料添加剂分析（美国全国饲料

7、协会NFIA分析方法概要）》报导的方法对试样提取条件、色谱测定条件及试样处理技术进行了研究改进，建立了简便、快速的分析操作程序不仅大大缩短了样品前处理时间，提高了工作效率，而且其精密度和准确度结果与国标方法基本相同[28]。实验过程中应注意：(1)样品前处理加入Na2CO3溶液后,溶液pH值必须呈明显碱性,如果样品中含有酸性物质(如抗坏血酸,氨基酸)需增加Na2CO3的用量。由于一些维生素对光敏感,故需用棕色玻璃容器;样品溶液中的叶酸不稳定,超过20h峰面积就会下降约25%,故样品处理后需避光并尽快检测；(2)离子对试剂的选择。采用HPLC分析复

8、合预混合饲料中5种B族维生素时,VB1、VB6[29]有重峰现象,加入离子对试剂可改善峰形且使VB1、VB6形成离子对而使各组分相应延长