正交法优化蟾酥酒炮制工艺研究

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1、正交法优化蟾酥酒炮制工艺研究袁旭江1，袁梦泓1，沈嘉茵2，裘建社3*（1-广东药学院，广东广州510006；2-深圳市妇幼保健院，广东深圳518000;3-广东博罗先锋药业集团，广东惠州516100）【摘要】目的：对蟾酥进行酒炮制工艺研究，筛选最佳炮制工艺。方法：采用正交法进行酒炮制工艺研究，以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总保留率为指标，运用高效液相色谱指纹图谱法进行含量和分析。结果：各因素对酒制工艺影响大小顺序为炮制时间>炮制温度>药辅重量比例，炮制时间具有显著影响，且蟾酥经酒炮制后化学成分存在降低现象。蟾酥酒炮制最佳工艺为：酒精浓度为5

2、5%乙醇，药辅比为1:2，在60℃下炮制12h。结论：本文方法稳定，操作简便，为进一步制订蟾酥酒炮制规范化工艺提供依据和基础。【关键词】蟾酥；高效液相色谱法；正交设计；炮制蟾酥的应用始载于唐代的《药性论》，在《中华人民共和国药典》2005年版一部中明确记载了蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍BufobufogargarizansCantor或黑眶蟾蜍BufomelanostictusSchneider的耳后腺及皮肤腺分泌的白色桨液，经加工干燥而成[1]。蟾酥具有明显的强心、止痛、解毒、抗肿瘤等作用，早已引起国内外的广泛关注，华蟾酥毒基和脂蟾毒

3、配基既是有毒成分[2~4]又是活性成分[5~6]，近年来多将其作为蟾酥质量控制的主要指标。由于蟾酥生品有毒，入药需经炮制，蟾酥传统炮制品有酒制、乳制、滑石粉煨制等多个品种[7~8]，而现代应用最多的蟾酥炮制方法为酒制，《中华人民共和国药典》规定酒制及其炮制比例[1]，但鲜见系统全面蟾酥酒炮制工艺报道，缺乏具体规范的酒炮制工艺。为此，笔者采用正交设计法，以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基主要成分总保留率为指标，对蟾酥进行细致全面的酒炮制工艺研究，优选蟾酥酒炮制工艺，为蟾酥酒炮制工艺的规范化提供基础和依据。华蟾酥毒基脂蟾毒配基1仪器与试药BS124

4、S电子分析天平(德国Sartorius)，BP211十万分之一电子分析天平(德国Sartorius)，电动恒温水浴锅(上海一恒电子仪器厂)，Agilent1100高效液相色谱仪。华蟾酥毒基对照品(中国药品生物制品检定所，批号803-9202)、脂蟾毒配基对照品(中国药品生物制品检定所，批号110718-200507)；乙醇、磷酸为分析纯，甲醇、乙腈为色谱纯，水为三蒸水。蟾酥药材收集了4批，经鉴别均为蟾蜍科动物中华大蟾蜍BufobufogargarizansCantor或黑眶蟾蜍BufomelanostictusSchneider的耳后

5、腺及皮肤腺分泌的白色浆液。2华蟾酥毒基和脂蟾毒配基检测方法建立本实验采用高效液相色谱法，以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总保留率为检测指标，对蟾酥酒炮制前后样品进行分析检测，并计算。计算公式：总保留率％＝炮制后总含量/炮制前总含量×100%。2.1色谱条件色谱柱：AgilentZORBAXSB-C18柱（5μm，4.6x250mm），流动相：乙腈-0.01%H3PO4溶液（55:45），流速：1.0mL·min-1，检测波长：296nm。2.2对照品的制备对照品经五氧化二磷低温真空干燥24h后，精密称取适量，用甲醇溶解定容，分别制成华蟾酥毒基

6、浓度为0.0242mg•mL-1、脂蟾毒配基浓度为0.0266mg•mL-1的混[基金项目]：广东省中医药管理局（1060042）[作者简介]袁旭江，男，助理研究员，医学硕士，从事中药新药及其质量研究，Tel：（020）35392540，E-mail:xjyuan.xj@163.com[通讯作者]*裘建社，男，大学，高级工程师，从事中药制剂研究，Tel:（0752）6317886，E-mail:qiujs888@126.com合对照品溶液。2.3标准曲线的制备分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、15、20μL，分别注入高效液相

7、色谱仪，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得华蟾酥毒基的回归方程为Y=6.36×102X+1.14，r=0.9999，在0.0484~0.484μg范围内线性关系良好；脂蟾毒配基的回归方程为Y=8.26×102X-0.69，相关系数r=0.9999，在0.0532~0.532μg范围内线性关系良好。2.4供试品溶液的制备取样品粉末约25mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20mL，称重，置水浴锅上加热回流提取1h，放冷，称重，补足甲醇减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。2.5系统适用性试验按2.

8、1项下的色谱条件进行测定，华蟾酥毒基和脂蟾毒配基色谱峰的理论踏板数均不低于6600，对称因子均大于0.96，色谱峰分离度达到1.2以上，各成分紫外吸收光谱一致。供试品和对照品高效液相色谱图见图1。图1供试品和对照品高效液