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1、cmyc在鼻腔内翻乳头状瘤中的表达及临床意义【摘要】目的：探讨原癌基因cmyc在鼻腔内翻乳头状瘤(SNIP)中的表达及临床意义，以期能寻找到cmyc与SNIP发生的性。方法：收集武汉市中心医院病理科2000～2007年鼻腔内翻乳头状瘤存档蜡块20例，另取瘤组织周围组织5例作对照，采用免疫组织化学SP法检测cmyc相关抗原。在显微镜下(×400),测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率。采用HPIAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对cMyc在
2、各组中的表达进行定量分析。结果：SNIP中cMyc表达的平均光密度为0.3290±0.0218,对照组cMyc表达的平均光密度为0.0854±0.0112;SNIP中cMyc表达的阳性面积率为0.2873±0.0152,对照组cMyc表达的阳性面积率为0.0754±0.0124，SNIP与对照组比较(P<0.05)，差异有显著性。结论：cmyc在鼻腔内翻乳头状瘤中的高表达，有助于SNIP的诊断。【关键词】cmyc;鼻腔内翻乳头状瘤;免疫组织化学;相关分析鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(sino
3、nasalinvertedpapilloma,SNIP)9是发生于鼻腔鼻窦的粘膜上皮源性良性肿瘤,其病理组织学为良性,但具有恶性生物学行为,呈侵袭性生长,局部破坏性强,易复发和恶变,据报道其复发率从30%～78%不等,恶变率从5%～21%不等[1]，探讨影响其发生的因素一直是临床及病理医师关注的焦点。原癌基因cmyc自发现以来一直受到人们的广泛重视,它不但参与了细胞的重要活动增殖,分化与凋亡,而且还涉及了人类肿瘤的发展和演进[2，3]。本研究采用免疫组化方法检测cmyc在鼻腔内翻乳头状瘤与正常粘膜
4、组织中的表达，旨在探讨cmyc在鼻腔内翻乳头状瘤的发生中的表达及意义。 1材料和方法 1.1材料 1.1.1材料来源收集武汉市中心医院病理科2000～2007年鼻腔内翻乳头状瘤存档蜡块20例，其中男性13例，女性7例。所有切片经病理学专家诊断为鼻腔内翻乳头状瘤。另取瘤组织周围组织5例作对照。 1.1.2材料分组将实验分为鼻腔内翻乳头状瘤组和对照组。 1.2主要试剂和仪器 1.2.1主要试剂浓缩型鼠抗人cMyc9单克隆抗体,(北京中山生物技术有限公司);超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂
5、盒(福州迈新公司);DAB显色试盒及多聚赖氨酸(北京中山生物技术有限公司)。 1.2.2主要仪器YWY781型医用微波仪，250W，50Hz(浙江临安电子器材厂生产);家用高压锅;电热恒温干燥箱(湖北黄石医疗器械厂生产);显微镜成像系统(Olympus公司)。 1.3方法 1.3.1蜡块切片厚5μm，贴片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上，置于烤箱烤干待用。 1.3.2免疫组织化学SP法检测cmyc相关抗原 具体步骤： ①4μm组织切片常规脱蜡至水后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3m
6、in; ②抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然冷却后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗5×3min;9 ③滴加3%过氧化氢，37℃湿盒孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min; ④正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景; ⑤甩去多余血清，分别滴加一抗，4℃孵育过夜，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×5min; ⑥滴加生物素标记的二抗37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min; ⑦滴加
7、链霉素抗生物素蛋白过氧化物复合物37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min; ⑧滴加新鲜配置的DAB显色液显色，光镜下控制反应时间(约3～5min)，自来水冲洗终止反应; ⑨苏木素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝; ⑩梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检;9 用PBS代替一抗作为阴性对照组，购买的阳性片作为阳性对照组。 1.3.3免疫组织化学结果判断 cMyc以胞核或胞质出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除细胞核染成
8、蓝色外，应无棕黄色反应物。 采用HPIAS1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对cMyc的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400),测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%)。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。 1.4统计学处理 数
