伴大豆球蛋白亚基色谱分离和制备及结构表征

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1、伴大豆球蛋白亚基色谱分离和制备及结构表征作者：袁德保杨晓泉黄科礼【摘要】　　研究了色谱方法对伴大豆球蛋白组成3个亚基的分离纯化工艺条件，并利用圆二色光谱对纯化得到的3个亚基的二级结构和三级结构进行了表征。结果显示：利用离子交换色谱（DEAEsepharosefastflow，DEAE为二乙氨乙基）和金属螯合层析（Immobilizedmetalaffinitycolumn，IMAC）相结合的方法，能将3个亚基组分完全分开，得到了能制备相对大量的3个亚基α′,α和β的稳定工艺，纯度为95%，回收率达75%。远紫外CD结果显示，在3个亚基的二级结构中，α螺旋较少，但都具有较高含量的β

2、折叠和无规卷曲；近紫外CD结果显示，3个亚基在制备过程中因为尿素的变性作用，都已经散失了三级结构。【关键词】伴大豆球蛋白；亚基；纯化；结构　　AbstractTheisolationprocessofthethreeconstituentsubunitsofsoybeanconglycininwasstudiedbythechromatographicmethodandthenthesecondaryandtertiarystructuresofthreeconstituentsubunitswerecharacterized.Theresultsshowedthatthecomb

3、inationofdiethylaminoethyl(DEAE)SepharoseFastFlowcolumnandimmobilizedmetal11affinitycolumn(IMAC)succeededinisolatingthesesubunitscompletely,givinghighpurity(95%)andatotalrecoveryratioof75%.ThedatafromfarUVCDshowedthesubunitshadrelativelylowcontentofαhelixandhighcontentofβsheet,βturnanduno

4、rderedstructure.Thecontentsoftheirβsheetintheisolatedsubunitswerehigherthanthoseofconglycinin,whereastheircontentsofunorderedstructureswerelowerthanconglycinin.ThenearUVCDshowedtheisolatedsubunitslosttheirtertiarystructureduetothedenaturalizationofureainthepurificationprocess.　　KeywordsCongl

5、ycinin;Subunits;Purification;Structure　　1引言伴大豆球蛋白是大豆的两种主要贮藏蛋白之一，占大豆贮藏蛋白含量的30%[1,2]。伴大豆球蛋白通常以由3个亚基α′,α和β通过非共价键形成的三聚体形式存在。大豆贮藏蛋白因其良好的营养及功能特性，使其在食品领域中广泛应用。目前，伴大豆球蛋白的亚基水平的研究是一个热点，因为这类研究能解释伴大豆球蛋白在保健功效和食品应用方面的机制[3～6]。11Maruyama等［７］利用基因工程的方法，得到了未进行后期糖基化修饰的亚基以及不具有扩展区的亚基（αc和α′c）。Lovati等[3]利用制备型双向电泳得到了单

6、一的β亚基和α′,α的混合物。Maruyama等[8,9]从大豆缺失体中分离得到了3种亚基组分。Duranti等[10]建立了从传统大豆品种中较大规模制备α′的方法。此外，从传统大豆品种中制备3个亚基的方法也有报道[11,12]。但仍需建立一种能制备高纯度且较大制备量的分离制备方法[13,14]。而上述提到的几种制备方法在一般实验室难以操作(如制备型双向电泳、大豆缺失体品种)，且制备量小。本研究建立了能普遍适用的制备(具有一定制备量)高纯度伴大豆球蛋白的制备方法，并对制得的3个亚基的二级结构和三级结构进行了表征。　　2实验部分　　2.1仪器与试剂UVP凝胶成像系统；AKTA蛋白质纯

7、化仪（美国GE公司）；PYCZ30垂直板电泳仪（北京六一仪器厂）；MOS450园二色谱仪(法国BioLogic公司)。11低变性脱脂大豆片（白豆片，山东新嘉华有限公司提供）。白豆片粉碎后，过０．１８mm孔径筛并储存于4℃下密闭容器中。豆粉蛋白质含量为（55.5±0.4）％，氮溶指数84.0％。树脂（DEAEsepharosefastflow和Immobilizedmetalaffinitycolumn）和柱子（4.5cm×30cm,美国GE公司）。试剂为分析纯