grp78核酸疫苗在非小细胞肺癌模型中的抗肿瘤作用研究

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1、GRP78核酸疫苗在非小细胞肺癌模型中的抗肿瘤作用研究作者：李小彦，朱小庆，于志坚，黄健【摘要】目的：研究GRP78核酸疫苗对非小细胞肺癌的预防作用及生存期影响。方法：将携带GRP78基因的真核表达载体肌肉内注射免疫C57BL/6小鼠，完成3次免疫后，接种小鼠非小细胞肺癌细胞（Tc-1），以此来观察该疫苗对非小细胞肺癌的预防作用及生存期影响。结果：免疫后的治疗组肿瘤生长体积小于对照组，平均生存期比对照组延长了25天，免疫细胞分泌细胞因子肿瘤坏死因子（TNF-α）、γ干扰素（IFN-γ）的水平和对靶

2、细胞的杀伤率明显高于对照组。结论：GRP78核酸疫苗能够提高机体免疫细胞对非小细胞肺癌的杀伤能力，延缓肿瘤生长，延长生存期。【关键词】非小细胞肺癌；GRP78；核酸疫苗[Abstract]Objective:Tostudytheeffectofanti-tumoractivityonprophylaxisandsurvivalperiodbyadministeringGRP78DNAvaccine.Methods:TheeukaryoticexpressionplasmidcontainingGR

3、P78genewasinjectedintramuscularlyintohindlegofC57BL/6femalemice.Afterthreevaccinations,theyweres.c.inoculatedwithlethaldosesofTc-1tumorcells.Thetumor14volumesweremeasuredandsurvivaltimeswererecordedforeachindividualmouseaftertumorchallenge.Results:The

4、tumorvolumesoftreatmentgroupwerelessthanthoseofcontrolgroups.Moreover,comparedwithcontrolgroups,theaveragesurvivaltimeoftreatmentgroupwasprolongedsignificantly.Inaddition,thelevelofTNF-αandIFN-γsecretedbythesplenocytesandthecytotoxicityoftreatmentgrou

5、pwashigherthanthatofcontrolgroups.Conclusion:GRP78DNAvaccinecanenhanceanti-tumoractivity,reducetumorvolumeandprolongsurvivaltime.[Keywords]Non-smallcelllungcarcinoma；GRP78；DNAvaccine葡萄糖调节蛋白-78（glucose-regulatedprotein78，GRP78）为内质网分子伴侣蛋白，分子量78kD，属于HSP7

6、0家族成员，由于最初在低糖培养条件下发现它高表达而得名。GRP78介导新生蛋白的加工成熟，防止新生多肽的聚集、错误折叠并保持其构象稳定[1,2]。在热休克、低糖、低氧、过氧化物增多等应激状态下，内质网新生蛋白会发生错误折叠，这激活了细胞内的未折叠蛋白反应（unfoldedprotein14response，UPR）[3]，通过活化的ATF6作用于GRP78启动子，进一步上调了GRP78基因的转录活性，其表达量可提高10～25倍左右[4]，另外GRP78还能转移内质网腔内的错误折叠蛋白，保持细胞在应

7、激状态下蛋白质合成的继续[5]。肺癌是目前在城市居民中肿瘤发病率和死亡率位居首位的一种常见肿瘤，其中非小细胞肺癌占肺癌发病率的80％左右。ShinBK等[6]利用质谱技术在A549非小细胞肺癌细胞株中发现GRP78高表达，Koom?覿giR等[7]发现非小细胞肺癌细胞中高表达的GRP78不仅与肿瘤耐药有关，还与肿瘤血管生成相关。由于GRP78在正常组织细胞是低表达的[8]，因此，GRP78可以作为一个新的肿瘤细胞靶抗原。本文运用了GRP78核酸疫苗来免疫C57BL/6小鼠，完成3次免疫后，接种小鼠

8、非小细胞肺癌细胞（Tc-1），以此来观察该疫苗对非小细胞肺癌的预防作用及生存期影响。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞系小鼠非小细胞肺癌细胞株Tc-1为本室保存。1.1.2动物C57BL/6小鼠，6～8周，雌性，购自斯莱克公司，饲养环境为SPF级。141.1.3试剂质粒pcDNA3.1和DH5α为本室保存。限制性内切酶BamHI、XbaI及PrimeScript逆转录酶、PrimeSTAR热启动DNA聚合酶、T4DNA连接酶均购自TaKaRa公司。RNA抽提使用RNeasyMin