pparα在老年大鼠酒精性肝损伤脂质过氧化中的作用

《pparα在老年大鼠酒精性肝损伤脂质过氧化中的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、PPARα在老年大鼠酒精性肝损伤脂质过氧化中的作用【摘要】　　目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)在老年酒精性肝损伤中的作用。方法将60只Wistar老年大鼠随机分为5组：对照组1组、观察组4组（包括4w组、8w组、12w组和16w组）。参照相关文献，观察组各组大鼠用白酒灌胃法复制酒精性肝损伤动物模型，分别于开始造模后的第4、8、12、16周时处死各组动物，采用RTPCR法检测肝组织中PPARα的表达，并检测脂质过氧化指标(血清FFA水平、肝组织中MDA含量及SOD活力)

2、变化，分析PPARα的表达与其他各项指标的相关性。结果与正常组比较，观察组各组大鼠PPARα的表达受抑制，随造模时间的延长，其表达水平逐渐降低，特别是在12、16w时更为明显（P<0.05,P<0.01）；而血清FFA水平、肝组织中MDA含量逐渐升高，肝组织中SOD活力逐渐降低。相关性分析表明，PPARα的表达与血清FFA水平、肝组织中MDA含量之间存在一定的效应关系，呈负相关，而与肝组织中SOD活力呈正相关。结论PPARα与脂质过氧化关系密切，在老年酒精性肝损伤的发病机制中

3、具有重要作用。【关键词】酒精性肝损伤；过氧化物酶体增殖物激活受体α；脂质过氧化　　过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisomeproliferator10activatedreceptors，PPARs）属调节目标基因表达的核内受体转录因子超家族成员，活化后具有多种生物学效应〔1〕。近年来研究发现，作为PPARs的亚型之一，PPARα具有调节脂肪代谢、炎症反应、免疫功能、细胞分化等作用，与多种肝脏疾病关系密切。笔者在以往动物实验中初步证实PPARα在酒精性肝损伤中表达受抑制，其基因表达

4、水平与NFκB（P65亚型）的表达、血清TNFα及IL6水平呈负相关，提示PPARα在酒精性肝损伤炎症反应中具有重要作用〔1〕。本实验拟采用RTPCR法观察PPARα在老年大鼠酒精性肝损伤中的表达变化及其与脂质过氧化的关系，进一步探讨PPARα在酒精性肝损伤中的意义。　　1材料与方法　　1.1实验动物分组　　健康老年Wistar雄性大鼠（22月龄）60只，随机分为5组：对照组1组，观察组1～4组，每组12只。观察组根据造模时间的不同分为4、8、12、16w组。实验期间各组大鼠均予以

5、饮用水及全价营养颗粒饲料喂养。　　1.2动物模型建立10　　大鼠经适应性喂养1w后，观察组参照相关文献造模〔2〕：用红星牌二锅头白酒（北京酿酒总厂生产，约为10.2mmol/L酒精溶液），以1.5ml/100g体重的剂量灌胃1次/d，分别连续灌胃4、8、12、16w。对照组以等剂量的0.9%氯化钠溶液灌胃1次/d。　　1.3标本制备　　各组大鼠分别于造模4、8、12、16w末，禁食12h，水合氯醛麻醉动物，下腔静脉采血，分离血清，用于检测血清游离脂肪酸（FFA）；并于肝右叶取部分新鲜肝组织在4℃

6、下制成肝组织匀浆，经高速离心后取其上清液，用于检测肝组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力；另一部分经液氮速冻，-80℃冰箱保存，以提取总RNA，用于RTPCR方法检测PPARαmRNA表达情况。　　1.4血清FFA水平测定　　采用比色法测定血清FFA水平，严格按照FFA测试试剂盒（南京建成生物工程公司提供）说明进行操作。　　1.5MDA含量、SOD活力测定10　　取制备好的肝组织匀浆，严格按照MDA、SOD测试试剂盒（南京建成生物工程公司提供）说明进行操作。　　1.6RT

7、PCR　　总RNA提取试剂盒(美国BBI公司产品)；RTPCR试剂盒(日本TaKaRaBiotech公司产品)；PCR引物经Primer5.0软件设计，由沈阳联星生物技术有限公司合成并纯化，见表1。表1目的基因引物序列及反应条件(略)肝组织总RNA严格按照总RNA提取试剂盒操作说明进行提取，变性琼脂糖电泳法检测RNA的完整性，以随机引物逆转录合成cDNA，-80℃冰箱保存备用。根据RTPCR试剂盒要求加入相应成分，构成反应体系。将反应体系放于RTPCR仪中进行扩增反应，RTPCR反应参

8、数：94℃预变性10s，然后94℃变性15s，62℃退火及聚合1min，共45个循环。在每个循环进行到62℃时进行荧光定量检测。反应完毕后，采用2%琼脂糖电泳检测产物的单一性。每组实验至少平行重复2～3次。选取2～6循环作为基线范围，值为0.8时作为阈值，得到各个RTPCR扩增反应的CT值，最后采用△△CT法计算公式得到观察组各组与正常组之间mRNA表达量的相对比值。　　相对含量%＝2－△△CT10△△CT＝△CT待测样品-△CT对照样品　　1.7统计学处理　　采用SPSS12.0统计软件包，