sds-page电泳试剂盒(细胞和组织)

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1、SDS-PAGE电泳试剂盒（细胞和组织）(产品编号DBI-1001;DBI-1002)I.简介:1）SDS-PAGE电泳实验是绝大部分实验中很重要的一个环节，高纯度的起始试剂是影响凝胶质量的一个重要因素，可靠的电泳结果取决于这一实验的可重复性。该试剂盒中配备了进行SDS-PAGE凝胶电泳实验所需要的全部试剂，而且对试剂盒进行了优化组合，使实验者可以方便的进行实验。聚丙烯酰胺凝胶电泳，可以分离从50~500kDa范围的蛋白质分子。II.试剂盒内容:试剂盒组分DBI-1001DBI-1002颜色10次20次预

2、混凝胶溶液（30%）分离胶缓冲液浓缩胶缓冲液TEMED试剂AP（过硫酸铵）试剂1*Loadingbuffer(空白对照)6*Loadingbuffer（样品使用）蛋白标准（普通）50ml20ml15ml200ul*1支0.06g*4支200ul*1支1ml*1支3支50ml*220ml*215ml*2100ul*2支0.06g*4支200ul*2支1ml*2支6支NMNMNMGRAYGRAYNMNMNM备注：AP（过硫酸铵）试剂在使用前，每只管子中加入600ul的去离子水，溶胶AP试剂，制成10%的溶液，

3、于4度保存备用。10%的AP溶液可保存1—2周。试剂溶液通常储存在4。C，在混匀或灌胶之前无须恢复到室温。III.蛋白质抽提步骤:一、样品的准备将所抽提好的蛋白质溶液，选用合适的蛋白定量试剂盒进行蛋白定量。具体内容可参考DBI公司的Bradford蛋白定量试剂盒（DBI—1045,1046）和BCA蛋白定量试剂盒（DBI—1047,1048）。将抽提好的蛋白质溶液溶解于样品缓冲液中。取500ul的蛋白加入试剂盒中所配备的6*Loadingbuffer（样品使用）100ul，混匀，于95度10分钟，待样品冷

4、却至室温即可使用。二、分离胶浓度的选择丙烯酰胺在凝胶中的百分比分离胶的分辨范围15%15——45KD12.5%15——60KD10%18——75KD7.5%30——120KD5%60——212KD实验者可以根据实验的蛋白质分子量大小选用不同的分离胶浓度进行分离胶的配制和实验。T%和C%是通常用来表示凝胶中丙烯酰胺组成的指标。T%是指丙烯酰胺总的含量（w/v），C%是指交联的丙烯酰胺（即双丙烯酰胺与丙烯酰胺单体的比值（w/v）。有以下公式得出：T%=[丙烯酰胺（g）+双丙烯酰胺（g）/总体积（ml）]×10

5、0%C%=[双丙烯酰胺（g）/丙烯酰胺（g）+双丙烯酰胺（g）]×100%三、试剂与缓冲液的准备分离胶的配制（7.5ml）浓度6%7.5%8%9%10%12%13%15%凝胶溶液（ml）1.51.87522.252.533.253.75水（ml）4.1253.753.6253.3753.1252.6252.3751.875分离胶缓冲液（ml）1.8751.8751.8751.8751.8751.8751.8751.875AP试剂（ul）100100100100100100100100TEMED试剂（ul）

6、1010101010101010取一个10ml的离心管（也可选用小型烧杯），根据上表选择的分离胶浓度，依次加入凝胶溶液、水、分离胶缓冲液、AP试剂、TEMED试剂，迅速混匀。（制成的分离胶溶液须在3分钟内灌注到玻璃平板内）浓缩胶的配制（5ml，3.9ml）工作液的用量灌制不同厚度的凝胶（两块6cm*8cm）所需的凝胶液量。配制电泳缓冲液取已配制好的5×电泳缓冲液150毫升，加去离子水至750毫升，备用。5×电泳缓冲液配方：总量为1L15.1gTris碱（0.125mol/L）72.0g甘氨酸（0.96mo

7、l/L）5.0gSDS(0.5%m/V)准备蛋白质分子量标准品：每个泳道加入5ul纯化的蛋白质分子量标准便足够。使用的设备1、该试剂盒配备的试剂是根据BIO-RAD公司的Mini—proteanIII型电泳仪来做配制的；其所配备的试剂和操作步骤也适用于其他公司所需试剂试剂用量凝胶溶液（ml）0.65水（ml）3.05浓缩胶缓冲液（ml）1.25AP试剂（ul）100TEMED试剂（ul）10凝胶厚度分离胶浓缩胶0.5mm5.6ml1.4ml0.75mm8.4ml2.1ml1.0mm11.2ml2.8ml1

8、.5mm16.8ml4.2ml的电泳系统。2、电源（电压200V，电流500MA）三、SDS－PAGE凝胶电泳1、按厂商的使用指南用两块干净的玻璃平板和0.75mm垫片组装电泳装置中的玻璃平板夹层，，并固定在灌胶支架上。2、将配制好的分离胶溶液，用加样器将其灌注到玻璃平板夹层中，至顶层约2cm高为止。3、在用移液器往夹层的液面顶部缓缓加入一层水，让凝胶在室温聚合30―――60分钟。聚合后，可见在水层和凝胶层的界面间有一清晰的折