腺病毒介导pdcd基因转移促进依托泊甙诱导的k细胞凋亡_论文

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1、腺病毒介导PDCD5基因转移促进依托泊甙诱导的K562细胞凋亡作者：阮国瑞，陈珊珊，常艳，李金兰，秦亚溱，李玲娣，郝乐，付家瑜，刘艳荣，黄晓军【摘要】本研究观察程序性细胞死亡5基因（programmedcelldeath5，PDCD5）重组腺病毒转染K562细胞后对化疗药物依托泊甙的增敏作用。利用AdMaxTM腺病毒载体包装系统，通过同源重组方法构建AdPDCD5重组腺病毒及对照腺病毒Adnull及AdeGFP；用不同感染复数将AdeGFP、Adnull或AdPDCD5转染人白血病细胞系，实时定量PCR检测PDCD5mRNA的相对表达

2、水平；利用MTT法及AnnexinVFITC/PI双染色流式细胞术观察依托泊甙对转染后K562细胞增殖与凋亡的影响。结果表明：AdeGFP腺病毒对白血病细胞系K562、Jurkat及CEM的转染效率可达60%-86%。AdPDCD5重组腺病毒能梯度增加K562细胞PDCD5mRNA的相对表达水平，腺病毒介导的PDCD5基因转移促进依托泊甙诱导的K562细胞凋亡。结论：PDCD5重组腺病毒可能成为化疗药物的增敏剂。【关键词】腺病毒AdenovirusmediatedPDCD5GeneTransferSensitizesApoptosiso

3、fK562CellsInducedby12/12EtoposideAbstractThisstudywaspurposedtoinvestigatetheeffectofadenovirusmediatedtransferofPDCD5geneonapoptosisofK562cellsinducedbyetoposide.RecombinantadenovirusPDCD5(AdPDCD5),controlvectorsAdnullandAdeGFPwereconstructedbyAdMaxTMvectorsystemrespecti

4、vely.AfterK562cellsweretransfectedbyAdPDCD5,AdnullorAdeGFPwithdifferentmultiplicityofinfection(MOI),theexpressionlevelofthePDCD5genewasexaminedbyRQRTPCRassay.TheeffectsofetoposideincombinationwithAdPDCD5ontheproliferationandapoptosisofK562cellsweremeasuredbyusingMTTassa

5、yandflowcytometrywithAnnexinVFITC/PIduallabelingtechnique,respectively.TheresultsshowedthatthetransfectionefficienciesofAdeGFPinK562,JurkatandCEMcellsrangedfrom60%to86%.ExpressionlevelofPDCD5geneinK562cellswasevidentlyincreasedfollowingtransfectionwithAdPDCD5.TheAdPDCD5s

6、ynergisticallyenhancedtheapoptoticpercentageofK562cellsinducedby12/12VP16,ascomparedwiththatofAdnull+VP16andVP16alonerespectively.ItisconcludedthatAdPDCD5maybeapotentialagentforenhancingthechemotherapyeffect.Keywordsadenoviruses；PDCD5；etoposide;K562cellline；apoptosis；gene

7、transferTF1细胞凋亡相关基因（TF1cellapoptosisrelatedgene19，TFAR19）是1999年发现的一种新的凋亡调控基因（GenBank登记号为AF014955）［1］，国际人类基因命名委员会将其命名为PDCD5(programmedcelldeath5)，将含PDCD5cDNA的真核表达载体转染白血病细胞系TF1等细胞后，可加速这些细胞的凋亡。已发现PDCD5在白血病细胞系Jurkat凋亡过程中发挥作用［2］，人重组PDCD5蛋白对白血病细胞系HL60具有促凋亡作用［3］，人重组PDCD5蛋白对化疗药物

8、羟基喜树碱诱导的肝癌细胞凋亡也具促进效应，并且显示了明确的量效关系［4］。在本实验中，我们对构建的PDCD5重组腺病毒进行了鉴定、扩增和