丁酸梭菌抑菌实验

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1、丁酸梭菌抑菌实验丁酸梭菌，又名酪酸梭菌，丁酸梭状芽孢杆菌，是一种专性厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌。丁酸梭菌代谢产物的突出特点就是丁酸、B族维生素以及叶酸含量高。大量研究表明，丁酸梭菌具有极强的整肠作用，它能够通过抑制致病菌的生长繁殖从而调节肠道的微生态平衡，预防和治疗腹泻、肠炎等疾病。　　1实验材料　　共培养用液体培养基;LB培养基　　2实验方法　　2.1丁酸梭菌对霍乱沙门氏菌的抑制作用　　①霍乱沙门氏菌种子培养：取平板活化好的菌种转接到LB液体三角瓶中，装液量25mL/100mL，37℃，150r/min培养12

2、-24h，取培养菌液测活菌数和pH值。　　②丁酸梭菌单独培养：取丁酸梭菌菌粉0.1g接种到装量为25mL/30mL的细菌培养瓶中，置于37℃静止恒温培养24h左右。(可按此比例扩大培养体积，最低比例为0.1g：25mL)theprovisionsofelectricpowerconstructionengineeringqualitysupervisionandquality...2.4.1.1theunitworksacceptancerateof100%,thequalityevaluationofatot

3、alscoreof95orabove;2.4.1.2regulatedWeldingNDTinspection100%,regulatedweldingapassingrateof>99%,andweldbeadappearance;2.4.1.3boilerhydraulic　　③丁酸梭菌和霍乱沙门氏菌混合培养：活化好的丁酸梭菌培养液5mL接种到装液量为20mL/30mL的细菌培养瓶中，再把培养好的霍乱沙门氏菌菌液1mL同时接入该共培养液中，37℃恒温静止培养。对照组为向同样的共培养液体培养基中(装液量为20

4、mL/30mL)接种霍乱沙门氏菌菌液1mL，37℃恒温静止培养。分别在16和24h测pH值及沙门氏菌活菌数。　　④计数采用平板涂布法。选择2～3个适宜梯度稀释液，吸取100μL涂布平板，倒置于严格厌氧培养箱或严格厌氧培养袋中，37℃培养18～36h后计数。每个梯度做两个平行，每个平板的菌落数在30～300范围内有效。　　2.2丁酸梭菌对肠出血性大肠杆菌、魏氏梭菌的抑制作用实验方法同上，魏氏梭菌种子液为严格厌氧，应采用共培养液体培养基。　　3实验结果　　3.1对霍乱沙门氏菌的抑制结果　　丁酸梭菌对霍乱沙门氏菌表现

5、出非常强的抑制作用，24h活菌数从单独培养时2.0×108CFU·mL-1减少到1.2×103CFU·mL-1。　　3.2对肠出血性大肠杆菌的抑制结果theprovisionsofelectricpowerconstructionengineeringqualitysupervisionandquality...2.4.1.1theunitworksacceptancerateof100%,thequalityevaluationofatotalscoreof95orabove;2.4.1.2regulated

6、WeldingNDTinspection100%,regulatedweldingapassingrateof>99%,andweldbeadappearance;2.4.1.3boilerhydraulic　　混合培养16h，肠出血性大肠杆菌活菌数从单独培养时3.5×108CFU·mL-1减少到7×106CFU·mL-1，24h活菌数减少到0.4×106CFU·mL-1，pH从6.8下降至4.6，呈现良好抑制作用。　　3.3对魏氏梭菌的抑制作用　　混合培养后，魏氏梭菌活菌数从单独培养时的1×108CFU·mL

7、-1减少到1×105CFU·mL-1，pH值从6.8下降到4.5，表现出良好的抑制作用。　　4小结　　(1)丁酸梭菌为严格厌氧菌，产氢气。液体培养基中加入厌氧指示剂，粉红色表明培养基上层有氧;　　培养一段时候后液体表面有气泡，为正常现象。　　(2)丁酸梭菌平板形态如下。　　(3)丁酸梭菌对霍乱沙门氏菌、肠出血性大肠杆菌和魏氏梭菌均有显著的抑制作用，可将肠出血性大肠杆菌和魏氏梭菌细菌含量控制在发病浓度之下，防止发病。尤其是对霍乱沙门氏菌抑制作用更强，可以达到净化霍乱沙门氏菌的作用。　　丁酸梭菌在体内的定植产生大量

8、的丁酸、乙酸、乳酸等短链脂肪酸，以及B族维生素、叶酸和一些消化酶类，促进肠道内有益菌群如双歧杆菌等乳酸菌的增殖，抑制魏氏梭菌、肠出血性大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌的繁殖，减少氨、胺、吲哚等肠道毒素的产生及对肠粘膜的毒害，使肠道内水分潴留明显减少，进而避免了其所导致各种肠道疾病的发生(坏死性肠炎、结肠炎、回肠炎等)，恢复肠免疫功能和正常的生理功能，达到无病防病、有病治病的作用。thepro