鳜胃蛋白酶原基因cdna全长的克隆与序列分析

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1、鳜胃蛋白酶原基因cDNA全长的克隆与序列分析吴雪峰,赵金良(上海水产大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海200090)关键词:鳜;胃蛋白酶原;cDNA末端快速扩增;克隆;序列分析中图分类号:S917文献标识码:ACloningandsequencingofthefull-lengthcDNAofpepsinogengenefromtheMandarinfish,SinipercachuatsiWUXue-Feng,ZHAOJin-Liang(KeyLaboratoryofAquati

2、cGeneticResourcesandAquaculturalEcosystemCertificatedbytheMinistryofAgriculture,ShanghaiFisheriesUniversity,Shanghai200090,China)Abstract:Pepsinogenisonekindofgastricdigestiveproteinasesbelonglingtoafamilyofasparticproteinases,whichissynthesizedinthega

3、stricmucosaofvertebratesandconvertedtopepsinsintheacidicenvironmentofgastricjuice.Themandarinfish(Sinipercachuatsi)isatypicalcarnivorousfishwhichonlypreyonsmalllivefishesafterhatching.Inordertounderstandthemolecularcharactersofpepsinogeninfish,thefull-

4、lengthcDNAofpepsinogengeneofS.chuatsiwasclonedbymeansofRT-PCRandrapidamplificationofcDNAends(RACE)andsequenced.Theresultrevealsa1367bpcDNAfull-lengthsequencecontaining43bp5′-untranslatedregion,187bp3′-untranslatedregionand1137bpopenreadingframe(ORF),wh

5、ichencodes378aminoacidswithcharacteristicsignalpeptidesandactivationpeptides.ThepepsinogenofS.chuatsialsohashighlyconservedaminoacidresiduesessentialforcatalyticactivityandconformationalmaintenance,whicharetwoessentialaspartylresiduesintheactivesiteand

6、sixcysteineresiduesinvolvedinformingthreedisulphidebonds.ThehomologyofaminoacidsequencesbetweenpepsinogenofS.chuatsiandothervertebratepepsinogensrangesfrom59.9%to91.2%,whichindicatesthepepsinogengeneishighlyconservedinevolution.TheNJphylogenetictreeofv

7、ertebratesfromtheaminoacidssequencesofpepsinogenshowedallfishwereclusteredasagroup,thepepsinogenofS.chuatsiwasthemostclosetopepsinogenAformⅡaofwinterflounder.ThesuccessfulcloningofpepsinogengenefromS.chuatsinotonlylaysthefoundationforfurtherstudyofitst

8、emporalandspatialexpression,butalsoprovidesnewmaterialforthemolecularcharacteristicandevolutionoffishpepsinogen.Keywords:Sinipercachuatsi;pepsinogen;rapidamplificationofcDNAends;cloning;sequenceanalysis收稿日期:2007-07-19资助项目:上海市重点学科建设项目(Y1

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