肾衰康灌肠液对慢性肾功能衰竭大鼠保护作用的研究.doc

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肾衰康灌肠液对慢性肾功能衰竭大鼠保护作用的研究【摘要】目的观察肾衰康灌肠液对慢性肾功能衰竭大鼠的影响。方法采用“单肾切除加腺嘌呤灌胃法”建立大鼠肾衰模型。28d后，治疗组大鼠每天用高、中、低剂量的肾衰康灌肠液，尿毒清组用20%尿毒清混悬液灌胃。60d后收集尿液，处死大鼠，取血、留取肾组织，测定血Ca2+、P3+及血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、中分子物质（MMS）和24小时尿蛋白定量、尿Ca2+、P3+，进行统计学处理。结果肾衰康灌肠液对慢性肾衰竭大鼠的血Ca2+、P3+及Scr、BUN和24小时尿蛋白定量、尿Ca2+、P3+有不同程度的改善。结论肾衰康灌肠液对大鼠慢性肾衰竭有一定的保护作用。【关键词】肾衰康灌肠液；大鼠；慢性肾衰ABSTRACT：ObjectiveToobservetheeffectofShenshuaikangGuanchangyeonchronicrenalfailurerats.MethodsThemethodofsinglekidneynephrectomywithgavageadeninewasusedtoestablishethemodelofchronicrenalfailure(CRF)inrats.28dayslater，theratswereadministeredShenshuaikangguanchangyeorniaoduqing.60dayslater,theratswerekilledandthelevelsofbloodcreatinine(Scr),ureanitrogen(BUN),calciumion(Ca2+),phosphorusion(P3+)andMMS,urineCa2+,P3+,and24hoururineproteinweredeterminedandanalyzedusingspsssystem.ResultsShenshuaikangguanchangyecouldsignificantlydecreasethelevelsofbloodScr,BUNandP3+,increasethecontentofCa2+.ConclusionShenshuaikangguanchangyehasprotectiveeffectonCRFrats.KEYWORDS：Shenshuaikangguanchangye;Rat;Chronicrenalfailure慢性肾功能衰竭(chronicrenalfailure,CRF)是指所有原发或继发性慢性肾脏疾病所致的进行性肾功能损害所出现的一系列症状或代谢紊乱的临床综合征。因肾脏不能维持其排泄代谢废物、调节水盐和酸碱平衡、分泌和调节各种激素代谢等基本功能,从而出现氮质血症、代谢紊乱和各系统受累等一系列临床症状的综合征。近年来我国CRF的发病率随着社会老龄化、高血压病、糖尿病等疾病的逐年增多，而呈现出明显上升的趋势。CRF属临床难治性疾病，大部分病人最后往往发展为尿毒症而需依赖于血液透析或肾移植延长病人的生命,但是因为设备和费用等条件的限制,尚不能全面普及。中药灌肠法近年来在缓解CRF症状、保护肾功能、延缓病情发展方面取得了一定的成就。肾衰康灌肠液由大黄、黄芪、丹参、红花组成，具有清热解毒、益气利尿、活血化瘀的作用。本实验采用“单肾切除加腺嘌呤灌胃法”建立大鼠肾衰(CRF)模型[1]，研究其对慢性肾衰竭大鼠的保护作用，并探讨其作用机制。4 1材料与方法1.1动物与分组健康雄性Wistar大鼠70只，体重200±20g(武汉大学医学院动物中心提供)。随机分为正常组、假手术组、CRF模型组、尿毒清组及肾衰康高、中、低剂量组，每组10只。1.2药物与试剂肾衰康灌肠液，海南天元制药厂（批号:20070617）；腺嘌呤，国药集团化学试剂有限公司（批号:20070925）；尿毒清，广州康臣药业有限公司，（批号:20060303）1.3CRF大鼠模型制备大鼠适应性喂养1周，除正常组外，假手术组和模型组大鼠行左肾全切除术。大鼠经10%水合氯醛(0.15mL/100g)腹腔注射麻醉，取俯卧位将大鼠固定于手术台上，背部手术区常规备皮，酒精消毒，以肋脊角为标志作左侧背部斜切口，于脊柱旁开0.5cm处，切开皮肤。分离腰大肌，进入后腹膜，找到肾脏，充分暴露左侧肾脏后，用蚊式弯止血钳在肾门下夹闭肾蒂，确认肾动脉、静脉和输尿管均包括在内后，用4号丝线在钳夹处结扎。暂不剪断结扎线头，用剪刀剪断结扎线上部肾蒂，摘除肾脏然后清理腹腔，提起未剪断的肾蒂结扎线头，并将结扎的肾蒂放入腹腔，确认无出血后剪断结扎线头。观察肾蒂残端无渗血，关闭腹腔，1号线分层缝合肌肉和皮肤。术后1周大鼠伤口愈合，正常组、假手术组大鼠用生理盐水灌胃，其余各组大鼠每天以200mg·kg-1·d-1剂量的腺嘌呤混悬液灌胃，连续28d。1.4给药方法尿毒清组大鼠灌胃给药，剂量为2.1g·kg-1·d-1，肾衰康高、中、低剂量组给肾衰康，剂量分别为10，6，2g·kg-1·d-1，1次/d，连续给药60天。正常组、假手术组、CRF模型组给等体积生理盐水。1.5指标测定大鼠连续给药60d后，各组大鼠分别置代谢笼收集24h尿液，自动生化分析仪(Beckman,美国)测定24h尿蛋白及尿钙(Ca2+)、尿磷(P3+)含量。大鼠称重，禁食12h，眼眶取血5～6ml，3000rpm离心20min，分离血清，自动生化分析仪(Beckman,美国)测定血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、Ca2+、P3+及中分子物质(MMS)。1.6统计学分析4 采用SPSS10.0统计软件对数据进行方差分析，并用q检验进行组间比较。2结果2.1腺嘌呤对大鼠血及尿生化指标的影响由表1可见，大鼠给予腺嘌呤后，血Scr、BUN及尿量、24h尿蛋白含量均明显升高，与正常对照组比较，差异具高度显著性(P<0.01)。而大鼠在给予腺嘌呤28d后，体重则显明减轻，表明腺嘌呤CRF模型是成功的。表1腺嘌呤对大鼠血及尿生化指标的影响与正常对照组比较，*P<0.012.2肾衰康灌肠液对大鼠血液生化指标的影响模型组大鼠血Scr、BUN、P3+及MMS水平均显著升高，而血Ca2+水平则显著降低，与正常对照组比较，差异均具高度显著性(P<0.01)。大鼠在给予肾衰康灌肠液后，高、中、低三个剂量均可显著降低腺嘌呤所致血Scr、BUN、P3+及MMS水平升高，增高腺嘌呤所致血Ca2+水平的降低，与模型组比较，差异具显著性或高度显著性(P<0.05或P<0.01)。见表2。表2肾衰康灌肠液对大鼠血液生化指标的影响与正常对照组比较，*P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.012.3肾衰康灌肠液对大鼠尿量及24小时尿生化指标的影响模型组大鼠24h尿量、24h尿蛋白及尿Ca2+均显著升高，而24h尿P则显著降低，与正常对照组比较，差异具高度显著性(P<0.01)。大鼠在给予肾衰康灌肠液后，高、中、低3个剂量均可部分恢复腺嘌呤所致大鼠24h尿量及24h尿蛋白、尿Ca2+、尿P3+的改变，与模型组比较，差异具显著性或高度显著性(P<0.05，P<0.01)。见表3。表3肾衰康灌肠液对大鼠对大鼠24小时尿量及尿生化指标的影响（与正常对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.013讨论中医临床强调辨证论治，但符合中医辨证要求的慢性肾衰竭“病证结合”动物模型很少，目前仅有腺嘌呤诱发大鼠慢性肾衰竭的动物模型、肾切除结合服用丙基硫氧嘧啶制作的慢性肾衰竭模型两种[2]。用大鼠单肾切除术加腺嘌呤灌胃法建立改良的腺嘌呤大鼠慢性肾衰竭模型[3,4]，该模型的特点是:①由于腺嘌呤直接引起肾小管间质损害，导致肾小管间质纤维化，引起大鼠慢性肾衰竭;②腺嘌呤按大鼠体重采用混悬液灌胃法造模，避免了在采用腺嘌呤饲料喂养法时大鼠因食量不同而致腺嘌呤用量的差异，且单肾切除后实验周期短，模型较稳定，腺嘌呤用量减少因而对其他器官的损害小。4 慢性肾功能衰竭是多种肾脏疾病的终末阶段,现代医学已经证明,慢性肾功能衰竭时通过肾脏排泄的尿素氮和肌酐明显减少,而通过肠道排泄的部分明显增加,最多可占机体排出总量的30%。中医学认为,慢性肾功能衰竭以湿浊内阻、瘀毒留滞为主,应以泻浊排毒、通下泻浊、活血化瘀、清热解毒为原则。目前已有研究者采用中药灌肠疗法治疗慢性肾功能衰竭,并取得较好的效果。我们选用肾衰康灌肠液对CRF大鼠进行治疗，结果显示肾衰康灌肠液能显著改善腺嘌呤CRF大鼠模型血、尿各项生化指标，表明肾衰康灌肠液对CRF具有较好的治疗作用。同时，我们注意到，用肾衰康灌肠液治疗CRF，不仅能降低BUN、Scr，而且能在一定程度上纠正钙磷代谢紊乱，促进氮质排泄，改善尿毒症的合并症。目前认为，分子量在500～5000之间的MMS，作为尿毒症中毒本源性物质，现已引起了普遍关注。MMS的不同组分具有各不相同的生物学作用，如抑制红细胞生成、抑制血红蛋白合成、抑制体内多种酶的活性等。这些生物作用在CRF的发病机制中起重要作用。本研究表明肾衰康灌肠液也具有降低MMS的作用，从而降低机体的损伤程度【参考文献】[1]赵宗江，魏晨，杨美娟，等.温脾汤对腺嘌呤性慢性肾衰竭大鼠肾功能的保护作用[J].山东中医药大学学报，2005，29(6):461[2]徐大基，卢富华，孙景波，等.建立慢性肾功能衰竭阳虚大鼠模型的研究[J].福建中医药，2004，35(3):36[3]张梓荣，周景华，姜南，等.腺嘌呤所致慢性肾功衰动物模型的病理形态学改变及其应用意义[J].实验动物科学与管理，1994，11(3):21[4]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社，1993:1038[5]关晓清，于敏，刘平夫，等．慢性肾衰竭的中医临床研究进展[J]．中国中西医结合肾病杂志．2003，4(5)：3064