VEGF-C对肝门部胆管癌细胞增殖以及侵袭能力的影响.doc

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1、VEGF-C对肝门部胆管癌细胞增殖以及侵袭能力的影响【摘要】　　目的：探讨血管内皮生长因子-C（VEGF-C）对肝门部胆管癌细胞侵袭和增殖的影响。方法：采用MTT法测定VEGF-C对肝门部胆管癌细胞系（FRH0201）细胞增殖的影响，流式细胞仪观察VEGF-C抗凋亡作用，应用3H-TdR掺入试验测定VEGF-C对FRH0201细胞同质黏附作用以及Boyden小室观察VEGF-C诱导肝门部胆管癌细胞转移的作用。结果：MTT法示VEGF-C能显著提高FRH0201的增殖活性，其效应随VEGF-C剂量以及

2、时间增加而增加，并显著抑制细胞凋亡。在Boyden小室培养的FRH0201细胞中分别加入1、5和10ng/ml的VEGF-C刺激培养后，Boyden小室碳酸酯滤膜下层浸润的胆管癌细胞数均高于对照组。分别用上述浓度的VEGF-C诱导FRH020160、90和120min后，FRH0201细胞的黏附能力显著低于对照组。结论：VEGF-C可以促进胆管癌细胞增殖，抑制其凋亡，增强细胞侵袭能力，并且与降低细胞的同质黏附作用密切相关。【关键词】血管内皮生长因子C　胆管肿瘤　细胞增殖　肿瘤转移　细胞黏附　　Eff

3、ectofvascularendothelialgrowthfactor-Con【ABSTRACT】Objective:Toinvestigatetheeffectofvascularendothelialgrowthfactor-C(VEGF-C)oninvasivecapabilityandproliferationofhumancholangiocarcinomacells.Methods:TheeffectofVEGF-ConFRH0201wasassayedbyMTT.Thecyclepa

4、tternandapoptosiswasassayedusingflowcytometry.TheeffectofVEGF-ConhomotypicadhesionandmetastasisinFRH0201wasexaminedwith3H-TdRinfiltrationandBoydenchamber.Results:VEGF-CcouldenhancetheproliferationofFRH0201inadoseandtimedependentmanner.AndVEGF-Ccouldinh

5、ibitcellapoptosissignificantly.Afterculturedfor2hourswith1,5,10ng/mlofVEGF-C,thereweremorecellsinthelowerchamberthanthecontrolgroup.After60,90,120minutesinductionby1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml,thecellsshowedsignificantlylowerhomotypicadhesionthanthatofthecont

6、rolgroup.Conclusions:VEGF-CcouldenhancetheproliferationofFRH0201andinhibitcellapoptosis.VEGF-CcoulddecreasehomotypicadhesionofFRH0201andmightbeacauseofthemetastasis.【KＥＹWORDS】VascularendothelialgrowthfactorC·Bileductneoplasms·CellProliferation·Neoplasm

7、metastasis·Celladhesion　　肝门部胆管癌是一种区域性疾病，具有沿神经周围淋巴间隙以“跳跃”形式转移的特点，但其转移复发的机制尚未完全明确［1］。而血管内皮生长因子-C（vascularendothelialgrowthfactor-C,5VEGF-C）在调节肿瘤血管新生以及淋巴管生成，促进肿瘤细胞进入淋巴管，通过淋巴系统向全身转移中具有重要的作用［2］。本研究以胆管癌细胞系FRH0201为研究对象，通过观察VEGF-C对其增殖、侵袭以及黏附作用的影响，进一步研究肝门部胆管癌细胞

8、的侵袭转移机制。1　材料与方法1.1　材料　人肝门部胆管癌细胞株FRH0201由吴小鹏教授建立［３］，重组VEGF-C购自美国Sigma公司，用无血清RPMI1640培养液配制成200ng/ml,置于-20℃冰箱保存待用；3H-TdR由北京中国原子能研究所提供；Boyden小室（膜孔径8μｍ，直径8.5mm）购于美国Neutroprobe公司；用人工重构基地膜材料Matrigel以及纤维连接蛋白Fn包被的96孔板，购自美国Sigma公司。1.2　VEGF-C影响人肝门