肺癌中PTEN基因表达及其与凋亡的关系.doc

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1、肺癌中PTEN基因表达及其与凋亡的关系【关键词】小细胞肺癌；,,PTEN；,,凋亡；,,免疫组织化学技术；,,TUNEL,,,,　　摘要：目的：探讨非小细胞肺癌组织中PTEN的表达及临床意义与细胞凋亡的关系。方法：72例肺癌组织(NSGLG和SCLC)、16例癌旁正常肺组织和7例肺良性病变组织PTEN的表达采用免疫组织化学SP法检测，34例SCLC组织肿瘤细胞凋亡采用TUNEL法检测。结果：PTEN基因在肺癌组织中的阳性表达率为54.16%，显著低于肺良性病变组织的93.75%(P<0.01)。小细胞癌组织中的阳性率为31.

2、8%，显著低于鳞癌组织(62.96%)和腺癌组织(50.00%)(P<0.05)。结论：PTEN基因的缺失与肺癌的发生与发展密切相关，并可能影响肿瘤的分化和癌细胞凋亡。　　关键词：小细胞肺癌；PTEN；凋亡；免疫组织化学技术；TUNEL　　PTEN基因是具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，它在调控细胞生长及细胞凋亡过程中起着重要作用。PTEN基因的失活与多种肿瘤的发生发展密切相关。本研究初步探讨PTEN在肺癌发病机制中的作用及PTEN蛋白的缺失与非小细胞肺癌癌细胞凋亡的关系。　　1材料和方法　　11材料　　收集我院手术切除后并

3、经病理证实72例肺癌组织标本，术前均未接受化疗和放疗。其中男51例，女21例；年龄34～80岁，平均年龄58岁。根据WHO《肺肿瘤组织学分型》标准分类，其中鳞癌27例，腺癌32例。高分化11例，中分化22例，低分化26例。小细胞癌症22例。另取16例肺癌病灶旁肺组织及7例肺良性病变组织作对照。所有组织均经10%的中性甲醛固定，石蜡包埋，3μm厚石蜡切片。　　12免疫组织化学方法　　PTEN为鼠抗人浓缩型单克隆抗体（1:100），PI3K为兔抗人浓缩型多克隆抗体（1:100），通用型SP试剂盒，均购自北京中山生物技术有限公司。采用S

4、P法，DAB显色，苏木素复染，并镜检分析结果。空白对照用PBS取代一抗，其余步骤不变。　　13原位凋亡细胞检测　　采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL），石蜡切片脱蜡水化、经组织处理液处理、蛋白酶K消化、过氧化氢孵育、加平衡液和TdT反应工作液、终止液终止反应后加过氧化物酶标记的抗地高辛抗体，DAB显色、苏木精衬染，树脂封片。凋亡试剂盒购自Roche公司和Intergen4公司。所有操作均按说明书进行。　　14结果判断标准PTEN　　结果判断以细胞质中出现棕黄色且高于背景无特异染色为阳性细胞，计算阳性细

5、胞百分率，<10%为“-”，10%～30%为“+”，30%～70%为“++”，70%～100%为“+++”。凋亡细胞结果判断以细胞核染成棕褐色为凋亡细胞，每一标本随机选取4个400倍视野，每一视野连续记数100个癌细胞，计算癌细胞凋亡指数。　　15统计学分析方法　　所有数据均用SPSS11.5软件包进行统计学分析，所得PTEN阳性表达率用卡方检验和Fisher检验。P<0.05时被认为有统计学意义。　　2结果　　21PTEN蛋白在肺癌组织、癌旁肺组织及肺良性病变组织中的表达　　PTEN蛋白在肺癌组织阳性表达为粗、细不一

6、的棕黄色颗粒，主要位于肿瘤细胞胞浆中，细胞核中也有少量表达。72例肺癌组织中PTEN蛋白阳性表达率为54.16%（39/72）。PTEN蛋白在癌旁肺组织及肺良性病变组织阳性表达为粗、细不一的棕黄色颗粒，主要着色于支气管粘膜上皮细胞及粘液腺及肺泡上皮细胞中。PTEN蛋白在癌旁肺组织阳性表达率为93.75%（15/16），在肺良性病变组织阳性表达率为100%（7/7），肺癌组织中PTEN蛋白阳性表达率显著低于癌旁肺组织及肺良性病变组织。见表1。　　表1肺癌与癌旁肺组织、肺良性病变组织间PTEN蛋白阳性表达率比较（略）　　注：肺癌与癌旁

7、肺组织比较，P<0.05，与肺良性病变组比较，P<0.01。　　22PTEN蛋白在非小细胞肺癌与小细胞肺癌中的表达　　在NSCLC中，PTEN蛋白阳性表达率为55.93%（33/59），其中，鳞状细胞癌阳性表达率为62.96%（17/27），腺癌阳性表达率为50%（16/32），两者比较差异无显著性（P>0.05）。在SCLC中，PTEN蛋白阳性表达率为31.38%（7/22），PTEN蛋白在非小细胞肺癌与小细胞肺癌中的阳性表达率比较差异有显著性（P<0.05）。见表2。　　表2非小细胞肺癌与小细胞肺癌PT

8、EN蛋白阳性表达率比较（略）　　2342例SCLC组织细胞凋亡的结果　　凋亡的癌细胞阳性染色为细胞核染成棕褐色，31例PTEN阴性染色SCLC标本癌细胞凋亡指数为（6.12±3.36）%，11例阳性染色癌细胞凋亡指数为（3.57±43.95）%，两