柿叶总黄酮提取工艺的研究

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1、柿叶总黄酮提取工艺的研究作者：张秀梅曾祖平王永红【摘要】　　目的对柿叶中总黄酮的提取工艺进行优选。方法采用正交实验法，以总黄酮含量为指标，对乙醇浓度、溶剂量及提取次数和时间３种因素进行了研究。结果将柿叶最粗粉用２５倍８０％乙醇提取４次，可以获得较高的提取率。结论此工艺有效成分提取率较高，重现性好，稳定可行。【关键词】柿叶总黄酮正交实验提取工艺Abstract:ObjectiveＴｏｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓｉｎＰｅｒｓｉｍｍｏｎＬｅａｖｅｓ．MethodsＴｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｖｏｌｕｍｅｏｆａ

2、ｌｃｏｈｏｌ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅａｎｄｆｒｅｑｕｅｎｃｙｗｅｒｅｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙｓｔｕｄｉｅｄｂｙｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓａｓｔｈｅｍａｒｋｅｒ．ResultsＴｈｅｍｏｒｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｗａｙｔｏｅｘｔｒａｃｔｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓｗａｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈ２５ｔｉｍｅｓａｍｏｕｎｔｏｆ８０％ａｌｃｏｈｏｌｕｎｄｅｒｒｅｆｌｕｘｆｏｒ４ｔｉｍｅｓ．ConclusionＴｈｉｓｍｅｔｈｏｄｏｂｔａｉｎｓｍｏｒｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ．Ｉｔｉｓｓｔａｂｌｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅ．Keyword

3、s:Ｐｅｒｓｉｍｍｏｎｌｅａｖｅｓ；Ｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓ；Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔ；Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ　　柿树是我国的重要经济树种之一，柿叶为柿树科落叶乔木植物柿DiospyroskakiＬ．ｆ．的新鲜或干燥叶片。国内外研究表明，柿叶制剂、柿叶茶及柿叶提取物具有降压、利尿、抑菌、止血、降脂、抑制癌瘤生长等多方面的生理活性。现代研究表明，柿叶中的主要有效成分为黄酮类，大多以苷的形式存在［１］，其具有抗急性脑缺血损伤神经保护作用，对心血管系统有增加冠脉流量、降低血压、降低心肌耗氧量、改善全身血液循环作用，能增加小鼠对窒息性缺氧的耐力，并对大鼠急性心

4、肌缺血有一定的保护作用。此外，柿叶黄酮还有抗氧化清除自由基、抗过敏、保肝［2］、抗炎、抗菌、抗肿瘤等功能，在防治中老年人脑动脉硬化、预防脑血栓形成、防治老年人痴呆和其它神经退行性疾病、皮肤抗衰老、美容等方面有广泛的开发应用前景［3］。为了有效利用柿叶所含的黄酮类物质，本实验以总黄酮含量为指标，采用正交实验优选了总黄酮最佳提取条件。1仪器与试药１．１仪器ＵＶ－２２０１紫外可见分光光度计；倾斜式高速万能粉碎机；ＰＢ２０３－Ｎ电子精密天平；ＡＪ１５０Ｌ电子精密天平。１．２试药实验用药材采自北京市昌平区，落叶晾干，经鉴定为柿树科柿属柿DiospyrosKakiＬ．ｆ．；芦丁对照

5、品；ＡｌＣｌ３·６Ｈ２Ｏ等均为分析纯。方法与结果２．１因素水平表乙醇作为提取溶剂，对乙醇浓度、溶剂量及提取次数和时间３种因素进行考察，每种因素分为３个水平，结果见表１。.2供试品溶液的制备精密称取柿叶最粗粉１ｇ共９份，按照表２Ｌ９正交实验设计方案，用对应浓度和体积的乙醇回流提取相应次数和时间。回流结束后合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至１００ｍｌ或２００ｍｌ量瓶中，分别以其相应的提取溶剂定容，过微孔滤膜，作为供试品溶液。表1正交设计因素水平表2L9正交实验设计及结果分析.3对照品溶液的制备精密称取１２０℃干燥至恒重的芦丁对照品０．０８２５ｇ于１００ｍｌ量瓶中，７０％乙醇

6、超声溶解，定容至刻度，得芦丁标准液０．８２５ｍｇ·ｍｌ－１。.4显色试剂及测定波长的选择Ａｌ３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法［４］：精密吸取芦丁标准液０．５ｍｌ和供试液１＃、４＃、７＃各适量至２５ｍｌ量瓶中，分别加入５％ＮａＮＯ２１．０ｍｌ，放置６ｍｉｎ，然后加入１０％Ａｌ３１．０ｍｌ，混匀，放置６ｍｉｎ，再加入４．３％ＮａＯＨ１０ｍｌ，用７０％乙醇定容至刻度，放置１５ｍｉｎ。在１９０～７００ｎｍ范围内扫描测定吸收光谱。　　ＡｌＣｌ３显色法［５］：精密吸取芦丁标准液０．１ｍｌ和供试液１＃、４＃、７＃各适量至１０ｍｌ量瓶中，分别加入０．１ｍｏｌ／ＬＡｌＣｌ３·６Ｈ２Ｏ１．０

7、ｍｌ，用５０％乙醇定容至刻度，摇匀，放置１５ｍｉｎ。在１９０～７００ｎｍ范围内扫描测定吸收光谱。　　比较上述两种显色法，用Ａｌ３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色后，明显生成红色絮状沉淀，此法不宜采用；而ＡｌＣｌ３显色后，芦丁标准液的λｍａｘ＝４１０ｎｍ，３个样品溶液的λｍａｘ＝４００～４１０ｎｍ，故选择ＡｌＣｌ３显色后４１０ｎｍ测定吸光度。.5显色稳定性考察精密吸取芦丁标准液０．３ｍｌ和供试液４＃１．０ｍｌ，依法显色后放置不同时间，测定吸光度，结果见表３，吸光度RSD分别为０．２％和０．３％，可见芦丁标准液和供试液４＃显色后４ｈ内基本稳定。.6