miR-124对人骨肉瘤MG-63细胞株增殖和侵袭的影响

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1、分类号：R738单位代码：10159密级：公开学号：201240040硕士学位论文（同等学力人员申请硕士学位）中文题目：miR-124对人骨肉瘤MG-63细胞株增殖和侵袭的影响英文题目：TheeffectsofmiR-124onproliferationandinvasionofhumanosteosarcomaMG-63celllines论文作者：李毅指导教师：王岩峰教授学科专业：运动医学完成时间：2018年3月中国医科大学硕士学位论文miR-124对人骨肉瘤MG-63细胞株增殖和侵袭的影响TheeffectsofmiR-124onprolifera

2、tionandinvasionofhumanosteosarcomaMG-63celllines论文作者李毅指导教师王岩峰教授申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科运动医学研究方向运动医学论文起止时间2016年1月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年3月2摘要目的：骨肉瘤（OS）是骨科中最为常见的原发恶性骨肿瘤，起源于间叶组织，其特征是能产生骨样组织的梭形基质细胞，多发生于15-25岁的儿童和青少年。好发于血运丰富的干骺端，其中发生在股骨远端和腔骨近端约占总病例数的50％。骨肉瘤的局部破坏性强，

3、致残率及死亡率高，血行转移发生率高，因此受到研究者的广泛重视。随着新技术的快速发展及治疗方式的不断改善，原发部位的骨肉瘤患者的５年存活率已经达到约70％。但是，由于其恶性程度高，预后差，转移或复发患者的长期生存机会仍低于20％。因此，进一步阐明骨肉瘤细胞增殖与转移的分子机制，对于骨肉瘤的预防以及相关药物研制具有重要指导意义。miRNA是内源非编码单链小分子RNA，由19～25个核苷酸组成，在种群中具有高度保守性。大量的研究证据陆续表明，miRNA在肺癌、前列腺癌、肝癌、乳腺癌以及胃癌等多种肿瘤组织中的表达都出现异常表达，这种表达异常增高或者表达异常降低

4、与肿瘤的多种生物学行为密切相关。miR-124是一个高度保守的miRNA，在肝癌、乳腺癌、宫颈癌与黑色素瘤等多种肿瘤组织中低表达。在对甲状腺乳头状癌细胞进行研究时发现，上调miR-124表达后能降低甲状腺乳头状癌细胞的侵袭和转移能力，调控IQGAP1的表达可能是其抑制甲状腺乳头状癌细胞的侵袭转移的机制之一。但miR-124在骨肉瘤中的确切生物学功能并不十分清楚。信号转导与转录激活因子3(STAT3)是JAK/STAT转导信号通路中重要的信号因子，激活后的STAT3能够形成同源或异源二聚体，介导信号从细胞外向核内的传递，进入核内的STAT3能够调节其下游

5、DNA的转录。STAT3参与体内如细胞增殖、凋亡、侵袭、血管生成等多种生物学过程，随着研究的深入，越来越多的学者认为STAT3是原癌基因。但是，在骨肉瘤中，STAT3的表达是否异常，其是否为miR-124的下游靶点，仍需要进一步研究证实。本研究通过检测骨肉瘤组织中miR-124表达，转染miR-124抑制剂或miR-124模拟物后骨肉瘤MG-63细胞增殖侵袭能力变化与STAT3蛋白的表达变化，探讨miR-124对骨肉瘤MG-63细胞增殖侵袭能力的影响及其机制。研究方法：1、组织标本来自于中国医科大学附属第一医院病理科2013年1月至2016年6月的27

6、例骨肉瘤组织和邻近正常骨组织，所有标本均由本院病理科医生确诊为骨肉瘤。人正常成骨细胞系hFOB1.19和骨肉瘤细胞系MG-63均购I中国医科大学硕士学位论文自中科院上海细胞研究所。miR-124模拟物、抑制剂与阴性对照购自上海吉玛制药技术有限公司，lipofectamine2000转染试剂、Trizol试剂与及RIPA裂解液购自Invitrogen公司，STAT3单克隆抗体购自CellSignaling公司，Transwell小室和Matrigel胶均购买于美国BD公司。超低温冰箱（日本SANYO公司）；荧光倒置显微镜（日本Nikon公司）；紫外分光光

7、度仪（德国Eppendorf公司）；荧光定量PCR仪ABI7500（美国ABI公司）；BiofugeStratos高速冷冻离心机（德国Heraeus公司）；PCR扩增仪（美国Beckman公司）。2、培养人正常成骨细胞系hFOB1.19与骨肉瘤细胞MG-63，参照Lipofectamine2000的说明书，取对数生长期的细胞进行转染；应用实时荧光定量PCR方法检测骨肉瘤组织和癌旁正常骨组织miR-124的表达；应用免疫组织化学方法检测骨肉瘤组织和邻近正常骨组织标本STAT3的表达；应用MTT方法检测转染miR-124模拟物或抑制剂后MG-63细胞增殖能

8、力的变化；应用Transwell实验检测转染miR-124模拟物或抑制剂后MG-63细胞增殖侵