SNT1059.3-2002进出口食品平板菌落计数滤膜法.pdf

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1、进出口食品平板菌落计数滤膜法Platecountforbacterialcoloniesinfoodforimportandexport—MembranefiltermethodSN/T1059.3—2002前言本标准是按照GB/T1.1—1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》进行编写的。其中平板菌落计数滤膜法中的培养基、培养温度和滤膜法等内容是参考美国公职分析化学家协会(AOAC)《公定分析方法》(1995年第16版17.2.05)，结合SN0168—1992《出口食

2、品平板菌落计数》样品制备中内容，并在实验的基础上编写而成。本标准的附录A是标准的附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国天津出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：陈子红、侯丽萍、唐丹舟、张思传、孙俐。本标准首次发布。1范围本标准规定了进出口食品中平板菌落计数滤膜法。本标准仅适用于进出口方便面、膨化食品、矿泉水、单晶糖、饮料、辣椒粒、牛奶(需用胰蛋白酶处理)中菌落计数的检验。2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。

3、所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。SN0330—1994出口食品中微生物学检验通则3抽样按SN0330规定执行。4检验方法4.1方法原理将滤膜放入滤器，过滤样品，使细菌留在膜表面。将滤膜放在胰化大豆坚牢绿琼脂(TSFA)培养基上培养，产生深、浅绿色菌落，进行计数。4.2设备和材料4.2.1滤器：一套，备有预滤器。4.2.2真空泵。4.2.3滤膜：有机或水相，孔径为0.45μm。4.2.4培养箱：36℃±1℃。4.2.5水浴箱：35℃±1℃。4.2.6吸管：1mL、10mL，具刻

4、度。4.2.7玻璃三角瓶和广口瓶：200mL，500mL。4.2.8试管：17mm×170mm，玻璃制。4.2.9玻璃珠：直径5mm。4.2.10平皿：直径90mm。4.2.11天平：感量0.1g。4.2.12均质器。4.3培养基和试剂4.3.1蛋白胨-吐温80(PT)稀释液(见附录AA1)。4.3.2胰化大豆-坚牢绿琼脂(TSFA)(见附录AA2)。4.3.3三(羟甲基)胺甲烷Tris缓冲剂(见附录AA3)。4.3.4胰蛋白酶贮存液(见附录AA4)。4.4样品制备4.4.1以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内

5、。如有包装，则用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。4.4.2样品匀液制备4.4.2.1固体或半固体食品：以无菌操作取25g样品，放入装有225mLPT稀释液的灭菌均质杯内，于8000r／min，均质1min～2min，制成1∶10的样品匀液。如样品均质时间超过2min，应在均质杯外加冰水冷却。4.4.2.2干燥或干粉食品：以无菌操作取25g样品，放入装有225mLPT稀释液的500mL灭菌广口瓶中（瓶内预置适当数量的玻璃珠）。迅速振摇，将样品混匀，制成1∶10的样品匀液。振摇时，幅度30cm，7s内振摇25次，也可

6、用机械振荡器振荡15s代替手摇。4.4.2.3液体食品：用灭菌吸管吸取25mL样品，放入装有225mLPT稀释液的500mL的灭菌广口瓶中，按4.4.2.2条中所述的方法，迅速振摇，制成1∶10的样品匀液。吸取样品时，吸管插入液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2s～4s内完全排入稀释液中。不要在稀释液中吹洗吸管。4.4.3稀释样品匀液4.4.3.1用10mL灭菌吸管准确吸取1∶10的样品匀液10mL放入装有90mLPT稀释液的200mL灭菌广口瓶中。按4.4.2.2中所述的方法，迅速振摇，制成1∶100的样品

7、液。4.4.3.2分别用10mL灭菌吸管按4.4.3.1条所述方法将样品匀液制成10倍递增PT稀释液的样品液如10－3、10－４、10－５……4.4.4酶处理的食品需要酶处理的食品取1∶10PT样品匀液10mL加酶原液1mL，在灭菌试管中混合放入35℃±1℃水浴中处理20min～30min，取出过滤。4.5过滤对每一份试样，选用适宜的三个连续稀释度的样液，每个稀释度的样液分别过滤两次。将灭菌的过滤装置连接于真空抽滤瓶上，以无菌操作将无菌滤膜放在抽滤底座上，用不锈钢夹子固定。以无菌操作加10mL～20mL无菌蒸馏水于

8、滤器中，加入PT样品匀液10mL，打开真空泵，抽吸过滤，再加入10mL～15mL无菌蒸馏水，抽吸过滤，关闭真空泵。用无菌镊子将滤膜取出。4.6培养以无菌操作将滤膜取出放于预先干燥的TSFA琼脂平板表面上，滤膜和琼脂表面之间应无气泡。将TSFA琼脂平板，平放入36℃±1℃培养箱内培养48h。4.7计数4.7.1培养后，对每个TSFA琼脂平板上产生的深、浅绿色菌