反相高效液相色谱法测定大豆异黄酮中5种组分

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1、第38卷第5期辽宁化工V01．38．No．52009年5月LiaoningChemicalIndustryMay，2009反相高效液相色谱法测定大豆异黄酮中5种组分谷岩，崔松林，于辅超，张元(辽宁省产品质量监督检验院，辽宁沈阳110032)摘要：建立了采用高效液相色谱一二极管阵列检测器(HPLC—DAD)同时检测大豆异黄酮中5种组分的方法。首先采用超声提取的方法进行处理样品，对提取溶剂进行了选择。采用C18柱，以甲醇：水为流动相进行梯度洗脱，检测波长为255nin。该方法的回收率为88．8％一101．2％，相对标准偏差(RSD)(n=6)为2．1％一4．5％，检出限

2、(以信噪比为3计)为0．5—0．8mg／L。该方法简单，重现性好，能有效提取和分离大豆异黄酮中5种组分。关键词：高效液相色谱法；异黄酮；大豆中囤分类号：O657．72文献标识码：A文章编号：1004～0935(2009)05—0348—03大豆异黄酮是从大豆中提取的，其分子结构阵列检测器、四元泵(Agilent公司，美国)，Milli—与人体自身分泌的激素极其相似，故称天然植物Q超纯水器(Millipore公司，美国)，超声波清洗器雌激素，它对妇女因雌激素不足引起的更年期综(昆山超声波仪器公司)。合症、骨质疏松、皮肤衰老具有很好的缓解、改善大豆苷(Daidzin)、

3、黄豆黄苷(Glycitin)、染料作用，可长期服用，且没有任何副作用。大豆异黄木苷(Genistin)、大豆苷元(Daidzein)、黄豆黄素酮具有特殊的双向调节作用，当人体雌激素不足(Glycitein)标准品均购自PERIMED公司(瑞时，它起到激活作用及时补充，当雌激素过剩时，典)，甲醇(色谱纯，美国迪马公司)，水为超纯水。它又起到拮抗作用，防止堆积和过剩，使服用者体1．2色谱条件内雌激素始终保持平衡。大豆异黄酮对人体保健色谱柱：AglientC18(4．6mm×150mm，5具有十分重要作用，近年来引起人们极大的重视。p,m)；流动相：甲醇(A)：水(B)。

4、大豆异黄酮主要包括大豆苷(Daidzin)、黄豆梯度洗脱：30％A(0～5min)5％A(5～黄苷(Glycitin)、染料木苷(Genistin)、大豆苷元15rain)—5％A(15～25min)_+30％A(25～(Daidzein)、黄豆黄素(Glycitein)等。目前国内外26min)一30％A(26～30min)；柱温：20oC；流对大豆异黄酮组分检测的相关报道，主要有高效速：i．0mL／min；进样量：10IxL；检测波长：255液相色谱法(HPLC)⋯、紫外分光光度法j、快nm。速测定法等，但测定的样品组分都较单一。本1．3样品处理文采用高效液相色

5、谱法，对大豆异黄酮5种组分称取大豆异黄酮样品0．0500g于50mL具同时进行测定，回收率高，满足检测要求。塞玻璃三角瓶中，加入10mL甲醇，超声提取l0min，定量转移至25mL容量瓶，用甲醇定容至刻1实验部分度。取适量样液于离心管中在3000r／min转速1．1仪器与试剂收稿日期：2009-02—17AglientLC一1100高效液相色谱仪，附二极管作者简介：谷岩(1975一)，女，高级工程师。第38卷第5期谷岩，等：反相高效液相色谱法测定大豆异黄酮中5种组分349下离心10min，取离心后的上层清夜经0．451xm度的混合标准使用液，依次进样，以峰面积为纵微

6、孔膜过滤，滤液进样测定。坐标，浓度为横坐标绘制工作曲线，其线性关系及检出限(S／N=3)结果见表1。2结果与讨论表1回归方程和检出限2．1提取溶液的选择为了获取尽可能高的提取效率，采用超声方式对样品进行提取，比较了甲醇、乙睛、二甲基亚砜作提取溶剂。结果表明甲醇对样品的溶解性最好，乙腈相对溶解性较好，但成本和毒性相对较大，二甲基亚砜溶解性最差。因此，确定以甲醇做2．5回收率和精密度实验提取溶剂。为了进一步验证方法的可靠性，进行了加标2．2梯度洗脱溶液的选择回收实验，分别加人高、中、低3种浓度混合标准本次实验中的5种待测组分都是极性化合溶液，充分混匀按1．4样品前处理方

7、法进行处理，物，且分离较困难。实验用C18柱分离考察了甲依法进样测定，平行测定6次，试验结果见表2。醇一水、乙腈一水做流动相对5种待测组分进行表2回收率和精密度测定结果(／7,=6)分离，以乙腈一水做流动相，样品组分大豆苷与黄豆黄苷很难分开。而以甲醇(A)一水(B)为流动相，各组分分离度满足要求，同时确定梯度洗脱程序为：30％A(0—5min)5％A(5—15rain)一45％A(15—25min)30％A(25～26min)_30％A(26—30min)。2．3检测波长的选择本次实验通过PE紫外一可见分光光度计对待测组分进行波长扫描，各组分在255nnl处都有