SNT2756-2011丁香疫霉菌检疫鉴定方法.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２７５６—２０１１丁香疫霉菌检疫鉴定方法犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅狉犪狊狔狉犻狀犵犪犲（犅犲狉犽．）犓犾犲犫２０１１０２２５发布２０１１０７０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准丁香疫霉菌检疫鉴定方法ＳＮ／Ｔ２７５６—２０１１中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６６８５１７

2、５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６印张０．７５字数１７千字２０１１年６月第一版２０１１年６月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２２１３２定价１６．００元犛犖／犜２７５６—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：王英超、厉艳、吴品珊、邵秀玲、张京萱、余冬冬、甘琴华、宋涛。Ⅰ犛犖／犜２７５６—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售丁

3、香疫霉菌检疫鉴定方法１范围本标准规定了进出境植物检疫中丁香疫霉菌检疫鉴定方法。本标准适用于丁香疫霉菌的寄主植物以及寄主植物中夹带土壤中的丁香疫霉菌的鉴定。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ１８０８５—２０００小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法３原理３．１分类学地位丁香疫霉菌［犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅狉犪狊狔狉犻狀犵犪犲（Ｂｅｒｋ．）Ｋｌｅｂ．１９０９］属藻菌界（Ｃｈｒｏｍｉｓｔａ），卵菌门（Ｏｏｍｙｃｏｔａ），腐霉目（Ｐｙｔｈ

4、ｉａｌｅｓ），腐霉科（Ｐｙｔｈｉａｃｅａｅ），疫霉属（犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅狉犪）。可引起寄主的根、茎、叶、果实的多种病害，如丁香的枝枯病（ｔｗｉｇｂｌｉｇｈｔ），苹果和梨的果腐病（ｆｒｕｉｔｒｏｔ）和颈腐病（ｃｏｌｌａｒｒｏｔ），板栗和山毛榉树的根腐病（ｒｏｏｔｒｏｔ），柑桔流胶病（ｇｕｍｍｏｓｉｓｏｆｃｉｔｒｕｓ）等。３．２鉴定依据丁香疫霉菌的形态特征、生物学特性、寄主范围等是该检疫鉴定方法的依据（参见附录Ａ）。４仪器４．１生物显微镜（具油镜镜头）、具透射光源的体视显微镜（最大放大倍数不低于５０×）。４．２超净工作台。４．３电子天平。４．４光照恒温培养箱。４．

5、５高压灭菌器。４．６培养皿。４．７医用手术剪、镊子。４．８烧杯（５ｍＬ、１０ｍＬ）。４．９试管（直径１２ｍｍ）。４．１０载玻片、盖玻片。４．１１三角瓶（２５０ｍＬ）。４．１２量筒（５００ｍＬ）。４．１３Ｐａｒａｆｉｌｍ膜或无色透明塑料袋。４．１４研钵。１犛犖／犜２７５６—２０１１版权所有·禁止翻制、电子发售５药品试剂与培养基５．１匹马菌素（ｐｉｍａｒｉｃｉｎ，研究用纯粉剂）。５．２安苄青霉素（ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ，研究用纯粉剂或市售医用注射粉剂）。５．３利福平（ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ，研究用纯粉剂或市售医用注射粉剂）。５．４五氯硝基苯（ｐｅｎｔａｃｈｌｏｒｏｎｉｔ

6、ｒｏｂｅｎｚｅｎｅ，研究用纯粉剂或市售可湿性粉剂）。５．５制霉菌素（ｎｙｓｔａｔｉｎ，研究用纯粉剂或市售医用内服片剂）。５．６恶霉灵（ｈｙｍｅｘａｚｏｌ，研究用纯粉剂）。５．７席尔氏浮载剂：见ＧＢ／Ｔ１８０８５—２０００中附录Ａ。５．８琼脂粉。５．９无荧光显微镜物镜镜头油（犖ｄ＝１．５１６）。５．１０永久封片剂。５．１１β谷甾醇。５．１２基础培养基：ＰＤＡ培养基、Ｖ８培养基（Ｖ８Ａ）或玉米粉琼脂培养基（ＣＭＡ），配制方法参见附录Ｂ。５．１３半选择性培养基：１０００ｍＬ基础培养基经常规灭菌并冷却到５５℃左右时加入下列抗菌素母液，使抗生素有效含量分别为：匹马菌素１

7、０ｍｇ、安苄青霉素２００ｍｇ、利福平１０ｍｇ、五氯硝基苯２５ｍｇ、制霉菌素５０ｍｇ、恶霉灵５０ｍｇ（均为有效成分）。摇匀，倒平板。６鉴定方法６．１症状检查仔细检查寄主植物的根、茎、叶、果实等部位，对有根腐、颈腐、枝枯、流胶、坏死和果腐症状的植物，以及土壤和介质取样送实验室做进一步检验。６．２组织分离将植株置于大烧杯中，在自来水流水下冲洗１ｈ～２ｈ，在根或茎组织病斑边缘病健交接处切取２左右的小块，７０％酒精消毒１ｍｉｎ，灭菌水浸洗１０ｓ～２０ｓ，灭菌滤纸吸干水分，移至半选择性培０．５ｃｍ养基，１７℃～２０℃下培养５ｄ～７ｄ。挑取可疑菌落在半选择性培养基上获得纯培养

8、，然后按照６．３．５～６