辅酶q10酸热破碎法提取工艺条件的研究(1)

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1、辽宁大学学报JOURNALOFHAoNlNGUNⅣERSlTy自然科学版NaturalSciences尉如ion第37卷第1期2010年V01．37No．12010辅酶Q，o酸热破碎法提取工艺条件的研究朱俊丰，季世坤，郑方亮，朱春玉，艾海新，孙婷婷，赵健，邱蕾，绍丽杰，刘宏生'，。(1．辽宁大学生命科学院，辽宁沈阳110036；2．辽宁省生物大分子计算模拟与信息处理工程技术研究中心，辽宁沈阳110036；3．辽宁省高校动物资源与疫病防治重点实验室，辽宁沈阳110036)摘要：为了研究酸热法提取辅酶Q。的最佳工艺条件，系统研究了酸

2、的种类，破壁温度，酸的浓度，酸的添加量，破壁时间等因素对辅酶Q。提取效果的影响．结果表明，酸热法提取辅酶Q。的最佳工艺条件为：盐酸浓度3mol／L，盐酸的添加量10ml／g(干菌)，破壁温度9O℃，破壁时间25min．关键词：辅酶Q。；酸热法；细胞破碎；提取工艺中图分类号：Q939．93文献标识码：A文章编号：lOOO-5846(2OlO)Ol-．OO67434辅酶Q。是人体细胞中重要的生化辅酶之破胞、高压匀浆破胞等物理破胞方法虽然对辅酶一，属内源性生物动力学的氧化还原物，不属于对Q，。几乎没有破坏，但这些方法需要的时间长，而心

3、功能有药理作用的药物，在心血管病临床上的且难以并行处理大量样品；碱醇皂化、碱皂化疗效主要有改善心肌能量的产生、使细胞生物膜等化学法简单、方便，但过于剧烈的破胞条件则可稳定及抗氧化的特性¨J．辅酶Q。对缺血性心脏能对酶Q。造成破坏；酶解破胞等生物方法虽然病和风湿性充血性心力衰竭所引起的症状(浮对酶Q。破坏最小，但由于处理菌株为革兰氏阴肿、肺充血、肝肿胀和心绞痛等)有效．3；在常规性菌株，酶解破胞的效果并不理想．经综合考虑，抗心肌缺血药物治疗基础上加用辅酶Q可显拟以化学法中的酸热法进行破胞，通过对破胞条著减少心绞痛发作次数，减少硝酸

4、酯类的用量，提件的考察和优化来达到辅酶Q，。破坏小、释放充高运动耐量和缺血性S—T及T波改变的转阴分的目的．率；辅酶Q。对心肌病、冠状动脉疾病、急性心1材料与方法肌梗塞、某些药物引起的心功能紊乱的预防和治疗及心肌保护有效-5；可降低脂蛋白(a)和血液1．1实验材料与仪器胰岛素，抑制胆固醇氧化而防止动脉粥样硬化；辅1．1．1菌种根瘤农杆菌(Agrobacteriumtttme—酶Q。对治疗高血压也有一定的疗效，且降压作faciens)LNUB335本实验室保藏用较为缓和，无不良副作用J．1．1．2培养基斜面培养基：牛肉膏蛋白胨培目

5、前常用的破胞方法可以大致分为三类，即养基．种子培养基：葡萄糖2Og／L，蛋白胨10g／L，物理法、化学法和生物法．在这三种方法中，超声酵母膏1Og／L，NaC15g／L，pH7．0．发酵培养基：·作者简介：朱俊丰，男，汉族，辽宁大连人，助理实验师，硕士学位，主要从事微生物发酵方面的研究基金项目：辽宁省教育厅“提升高等学校核心竞争力特色学科建设工程”项目资助通讯作者：刘宏生，Tel：024—62202796；E-mail：liuhongsheng@lnu．edu．Bn收稿日期：2009—12-2068辽宁大学学报自然科学版蔗糖4O

6、g／L，玉米浆2Og／L，(NH)2SO410g／L，量添加1、2、3、4、5、6mol／，L的盐酸，9O℃时处理KH2PO0．5g／L，K2HPO0．5g／L，MgS0·7H2030rain，进行细胞破碎．(4)破壁时间。以10rrd／g0．25g／L，pH7．0．的量添加3moL／L的盐酸，90℃分别处理1O、20、1．1．3实验试剂石油醚等提取试剂均为分析30、40、5O、60rain，进行细胞破碎．(5)酸的添加纯，辅酶Q。标准品购自于中国药品生物制品检量．分别按5、1O、15、2O、25ml／g添加3mol／，L的定所

7、．盐酸，90℃处理30min，进行细胞破碎．1．1．4实验仪器Wate~Breeze高效液相色谱1．2．5正交试验正交试验在单因素试验的基系统，沃特斯中国有限公司；Cary50紫外分光光础上，进行4因素3水平正交试验，采用(3)度计，美国瓦里安技术中国有限公司；CR一21G正交表，以辅酶Q。的提取量为考察指标．试验设高速冷冻离心机，天美科技有限公司；RE52CS一2计见表1．旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；DNP一9082型电热恒温培养箱，上海精宏实验设备有限公司．表1正交试验水平因素表一∞／暑￡一帮釜1．2实验方法I．2．1茵

8、体培养将1环生长良好的试管斜面种子接人装有50m1种子培养基的250rnl锥形瓶中，30cC，20or／min往复摇床培养24h，然后取54种子液加入装有100ml发酵培养基的500ml锥形瓶中，于32cI=，200r／min往复摇床培养962结果与分析h．10