产甲壳素酶菌株的筛选、发酵条件优化和酶学性质研究

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1、中国海洋大学硕士学位论文产甲壳素酶菌株的筛选、发酵条件优化和酶学性质研究姓名：屈宁申请学位级别：硕士专业：海洋生物指导教师：韩宝芹20080601产甲壳素酶菌株的筛选、发酵条件优化和酶学性质研究摘要本研究是从土壤中分离筛选得到菌株D和菌株S，研究表明，混合发酵培养其产酶的能力显著的提高，其产酶最适培养基组分为(％，w／v)：尿素1．O，K2HP040．07，KH2P040．03，MgS040．05，酵母粉0．5，甲壳素1．0。摇瓶发酵条件：pH5．5，2％(v／v)接种量，32℃，130rpm培养72h，500mL锥形瓶培养基装量为100mL。在最适产

2、酶发酵条件下，甲壳素酶活力可达到1．19U／mL。采用40％一80％(NI-14)2s04分级盐析、透析脱盐、甲壳素亲和层析、SephadexG．75凝胶过滤等分离纯化技术，获得了纯化的甲壳素酶。制品经过SDS—PAGE电泳，该甲壳素酶呈单一条带，分子量约为45kD。对该酶进行部分酶学性质的研究表明t该甲壳素酶的最适作用温度为60"C，最适反应pH为pH5．O；最适反应底物为粉末甲壳素；金属离子Fe2+，Mn2+对酶活力有明显的促进作用，Cu寸、ZIl2+则对酶活力具有明显的抑制作用；该酶除能降解甲壳素，对壳聚糖和羧甲基甲壳素也有一定的降解作用。该酶有

3、较好的稳定性。关键词甲壳素酶：发酵：分离纯化：酶学性质产甲壳素酶菌株的筛选、发酵条件优化和酶学性质研究ScreeningofChitinase-producingBacteriastrains，FermentationandSomePropertiesofChitinaseAbstractAsalloriginalchitinase—producingstrainS‘andstraind，screenedfromsoil，mixedfermentationgetallhighchitinase-producing．Theoptimalcompositi

4、onsofthemediumforthestrainproducingchitinasealeasfollows(％，w／v)：cotNH921．0，K2HP04O．07，KH2P040．03，MgS04‘7H20O．05，yeastextract0．5thechitin1．00H5．5)．Theoptimalcultivationconditionsforthestrainproducingchitinasewere500mLflaskcontaining100mLmedium，2％(v／v)amountofinoculation，32"Cincub

5、atingtemperatureandshakingcultivationa童130rpmfor72hours．Themostactivityofchitinaseoffermentationbrothis1．19U／m1．Thechitinaseisextractedbyammoniunlsulfateprecipitation(40’～80％saturation)，purifiedbychitinaffinitychromatographyandgelfiltration(SephacrylS一100column)．SDS—PAGEshowsasi

6、nglebandforthepurifiedcllitinaseandthemolecularweightisestimatedtobe45kDa．TheoptimaltemperatureandpHforhydrolysisofthechitosanaseale609Cand5．5，．IthadrelativelybroadpHadaptabilityanddemonstratedtoberelativelyheatresistant，TheenzymeactivitywassignificantlyinhibitedbyCu2+，Zn2+andsl

7、ightlyactivatedbyFe2+，Mn2+ationconcentrationbeing5mmoL／L．Theenzymeshowsactivityforhydrolysisofchitin，chitosanandcm—chitin．AcorrdingtOthestudy,thechitinaseshowedagoodstability．Keywords：Chitinase；Fermentation；Purification；Enzymecharacterization2独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的

8、研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研