犬瘟热病毒bei灭活苗的制备与免疫试验

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1、犬瘟热病毒BEI灭活苗的制备与免疫试验范泉水叶俊华*夏咸柱#朱文静*成都军区联勤部军事医学研究所，昆明650031(*公安部南昌警犬基地。南昌330100)(#解放军农牧大学军事兽医研究所，长春130062)摘要本文使用BEI灭活病毒的方法对LPCDV208强毒株进行灭活，并加入蜂胶佐剂制备犬瘟热病毒BEI灭活苗。将此灭活苗免疫接种CDV易感犬，同时以用福尔马林灭活的犬瘟热病毒灭活苗为对照，检测结果表明：犬瘟热病毒BEI灭活苗安全、有效，其诱导试验犬所产生中和抗体的能力明显高于该病毒的福尔马林灭活苗。关键词犬瘟热病毒BEI灭活苗免疫烷化剂类灭活剂是一类含烷基分子

2、去一个氢原子(CnH2n+1)化合物，它能与另一种化合物作用，将烷基引入形成烷基取代物，根据其结构可分为氮芥类、乙烯亚胺类和磺酸脂类。这类化合物的化学性质活泼，其灭活机制主要在于烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤，引起单链断裂、双螺旋键交联，妨碍RNA的合成，从而抑制细胞分裂。另外，也可与微生物的酶系统和核酸蛋白起作用，于扰核酸的代谢，因此，这类灭活剂能破坏病毒的核酸，使其完全丧失感染力。但并不损害其蛋白质衣壳，得以保留其保护性抗原。故是制备灭活病毒病苗较好的灭活剂。据报道烷化荆类的乙烯亚胺有7种衍生物(AEI、BEI、CEI、EEI、CEEI、API及APO)，

3、其中灭活效果最好的是BEI和AEt(-二乙烯亚胺和乙酰基乙烯亚胺)[1]。本研究采用BEI灭活病毒的方法对犬瘟热病毒(Callilledistemper，CDV)强毒LPCDV208株进行灭活。通过常规途径研制出犬瘟热病毒BEI灭活苗，经安全性试验和免疫试验检测，结果表明该灭活苗安全、可靠，其免疫原性明显优于传统的福尔马林灭活苗。现将结果报告如下：1材料和方法1．1病毒株犬瘟热病毒强毒LPCDV20876株的第五代MDCK细胞培养物，由本研究组分离获得，人工感染犬试验表明：该强毒对犬免疫原性良好。1．2试验动物2到3月龄CDV易感仔犬数65头，选自肉犬市场。1．

4、3抗原的制备使用犬瘟热病毒强毒LPCDV208株以10％的接毒量(体积比，以下同)单层接种于狗肾传代细胞(MDCK)上，37。C培养96h后收获病变细胞，连同上清一起冻融3次，作为试验用CDV细胞培养物，其毒力(TClDS0)为10—6／mL。一70℃保存。1．4灭活苗的制备1．4．1BEI灭活苗的制备取收获的CDV细胞培养物冻融液，按100：1的比例加入2％BEI溶液在室温条件下灭活28小时后，以50：1的比例加入2％硫代硫酸钠中止，最后再按2：1的比例混合以蜂胶佐剂。制成BEI灭活苗，疫苗中的病毒台量调整为1051℃Ⅲ50／mL。1．4．2对照灭活苗即犬瘟热

5、病毒的福尔马林灭活苗。取收获的CDV细胞培养物冻融液，加l‰福尔马林溶液灭活48小时，按2：1的比例加入蜂胶佐荆，制成福尔马林灭活苗，疫苗中的病毒含量也调整为105TCm60／mL。1．6无菌检验取少量的上述犬瘟热病毒BEI灭插苗和福尔马林灭活苗分别接种于普通琼脂、血斜和肉汤培养基中，按常规方法检测有无细菌生长。1．7安全性试验选用CDVSN抗体小于1：2的易感仔犬15头，每组5头。第1组和第2组为试验组，每头依次注射CDV的BEI灭活苗和福尔马林灭活苗各10mL，口鼻滴人各5mL；第3组的5只犬不接种作正常对照。隔离饲养14天，每天作体温、呼吸、精神、食欲、粪

6、便、尿性状等临床观察。1．8免疫原性试验选取2到3月龄CDV易感仔犬65头，分为7组，第1～3组为犬瘟热病毒BE[灭活苗组，每组各10头犬，分别肌肉注射犬瘟热病毒BEI灭活苗4mL、2mL、lmL。第4—6组为犬瘟热病毒福尔马林灭活苗组。每组各10头犬，分别肌肉注射犬瘟热病毒福尔马林灭活苗4mL、2mL、lull。第7组5头犬不接种作为对照组。以组为单位隔离饲养，于接种后第14天采血作CDVSN抗体效价测定试验。第14天所有犬均肌肉注射CDV强毒LtVmV208原液4mL，隔离饲养，当5头对照犬全部呈现犬瘟热病毒临床症状与病理解剖学变化时，以能使lO头试验犬中9

7、头以上完全保护的CDV灭活苗最低接种量即为其最低免疫量。2结果2．1无菌检验两种犬瘟热病毒灭活苗在三种培养基上的杂菌检验均为阴性。2．2安全性试验注射两种犬瘟热病毒灭活苗后，均未引起易感犬发病与死亡，注射部位未见明显的病理变化，免疫犬无任何不良反应，精神、食欲良好。2．3免疫原性试验结果如表附表免疫原性与最低免疫剂量试验结果Table1Theresultsofimmunogenicityandmininalmimnmnedoseassay由上表可看出：接种2mL(2×105TCIDSO)以上的犬瘟热病毒BEI灭活苗，即可使90％以上的CDV易感犬获得免疫保护；而

8、使用犬瘟热病毒福尔马林灭