藻蓝蛋白的抗癌活性研究

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1、第!"卷第#期浙江大学学报’工学版(?*/@!"A*@#$%%&年&&月)*+,-./*012345.-67-583,95:;’<-65-33,5-6=>53->3(A*8@$%%&藻蓝蛋白的抗癌活性研究J王勇&H钱峰&H钱凯先&H董强$’&K浙江大学生物技术系H浙江杭州!&%%$EL$K山东省医学科学院H山东济南$"%%#$(摘要B活细胞脱氢酶催化四唑盐’MNN(还原H生成溶于有机溶剂的蓝色甲月赞结晶H可定量反映细胞生长I流式细胞技术可根据细胞中OAP的质量分数来检测其所处的细胞周期I采用上述两种方法H研

2、究了藻蓝蛋白’QR(对S3T.细胞的抗癌活性I实验证明HQR对S3T.细胞生长有明显的抑制作用H当QR浓度为U%V6WT时对癌细胞的抑制率达!&K%XI初步认为这种抑制机理为BQR使S3T.细胞由合成期’=(或分裂期’M(向Y&期转变和积集H细胞OAP合成衰减I关键词B螺旋藻L藻蓝蛋白L四唑盐L流式细胞技术L人子宫颈癌细胞’S3T.细胞(中图分类号BZ&E文献标识码BP文章编号B&%%UCDE![’$%%&(%#C%#E$C%F螺旋藻’95,+/5-.(的蛋白质高达"%X]E%XH其中H藻蓝蛋白’QR(占

3、总蛋白的EX左右IQR具有特征性的吸收光谱和荧光光谱是一种新颖的荧光分子探针^&H$_I随着生物学‘医学‘海洋药物学等学科的发展HQR的生物活性已成为人们关注的热点I饭岛登等’&DU$(发现QR可提高淋巴细胞活性H增强机体抵抗力H继而在&DU!年发现QR能维持和促进正常受控细胞的功能H防止肿瘤的生长和复发I抗肿瘤药物的体外筛选H通常有染料排除法H软琼脂克隆法和^!^!_S_胸腺嘧啶掺入法等I但这些方法准确度较差H重复性低‘操作复杂H实验周期长I本文采用MNN法^F_和流式细胞技术对QR的抗癌活性进行了研究I

4、&材料与方法aKa实验材料S3T.细胞株’人子宫颈癌细胞(H由浙江省肿瘤医院提供IQR由浙江大学生物科学与技术系细胞实验室纯化制备IaKb主要试剂cQMd&#F%培养基’Y50>*R*(H胎牛血清’杭州四季青生物工程公司(H胰蛋白酶:,;95-’O50>*进口分装(HMNN’=56V.R*(H二甲基亚砜OM=e’M3,>fR*(HN,5:*-gC&%%’=56V.进口分装(HcA.93P’=56V.(HQd染料’=56V.(等IaKh溶液配制Qi=液B每升溶液含A.R/U@%%6‘fR/%@%$%6‘A.

5、$SQeFjS$e&@"#6‘kS$QeF%@!6H&"磅灭菌&"V5-IS.-f9液B每升溶液含A.R/&U@F%6‘fR/%@F%6‘R.R/$%@&F6‘M6=eFjES$e%K$6‘A.$SQeFjS$e%@%#6‘kS$QeF%@%#6HA.SRe!%@!"6H葡萄糖&K%%6H酚红%@%$6HU磅灭菌$%V5-IOCS.-f9液B每升溶液含A.R/U@%%6‘fR/%@F%6‘A.$SQeFjS$e%@%#6‘A.SRe!%@!"6‘酚红%K%$6HU磅灭菌$%V5-I收稿日期B$%%%C%#C

6、&$@基金项目B浙江省自然科学基金资助项目’!D#%ED(@作者简介万方数据B王勇’&D#FG(H女H四川人H副教授H从事细胞生物学和细胞工程研究I第Y期王勇9等,藻蓝蛋白的抗癌活性研究YA]!"#$%&’()*!+液,!"#$%&’-*&./01,234546378)*!+462791444:;*(<=’>%液9用?=@<调$<至AB39超滤除菌CD!!液,用EFG深解成37H;9超滤除菌9IJ避免保存CKBL主要仪器M@2自动细胞培养箱-NOPD0QRS1A249T0":=M06UG+59酶标仪-)V+

7、(119上海四达生物技术研究所59流式细胞仪-FR/W0’*&/>&’%0’M06UG+59细胞培养瓶-23:;59XY孔板92I孔板-华美公司5CKBZ

8、养2Ib后9更换新鲜培养液C其中I14组为实验组9每组每孔分别加入144a;质量浓度为248I48‘481Y4:7H;的EM液9使EM最终作用质量浓度分别为148248I48‘4:7H;C另一组为空白对照组9每孔加144a;EFGC于]AJ培养A2b后9加入D!!液924a;H孔9]AJ温育Ib9弃培养液9加入*DG@或无水乙醇-144a;H孔59轻微振荡使甲月赞结晶充分溶解9用酶标仪在IX4’:测定@*值9按下