细菌的接种分离与鉴定ppt课件

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1、细菌的接种、分离与鉴定思路常用细菌培养方法需氧培养法（一般培养）适用于需氧菌和兼性厌氧菌培养。培养温度：37℃（采用恒温培养箱）。培养时间：18～24h。二氧化碳培养法适用于奈瑟菌属和布鲁菌属等苛养菌培养。可采用烛缸法、二氧化碳培养箱。微需氧培养法适用于空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等微需氧菌培养。可采用抽气换气法。厌氧培养法适用于专性厌氧菌培养。厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等。细菌接种的基本程序灭菌接种环沾取标本接种灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境带菌接种环的正确烧法热导

2、法：从环的根部（靠近柄部）开始烧，通过热传导让接种环或针上带的菌慢慢受热，直至干燥，最后放在氧化焰（外层温度高）上彻底灭菌。从还原焰开始法：（内层温度低），带菌的接种环或针直接置于此不会引起气溶胶喷溅，待完全干燥后再移至氧化焰部位彻底灭菌。接种方法平板划线法原则和目的：通过划线稀释细菌获得单个菌落要领：G划线均匀而细密，不重复。A充分的利用培养基的面积。B培养基不能划破。GB培养时培养皿倒置。培养时培养皿倒置的原因一防止培养基的水分蒸发二防止形成的冷凝水滴落在培养基上造成染菌三倒放可以在某种程度上防止菌落蔓延，好形成单个菌落，利于计

3、数四防止外来的污染平板划线法（1）连续划线法此法多用于含菌量相对少，无菌部位来源的如血液，胸腹水，脑脊液等标本的细菌分离培养。（2）分区划线法（可分二区，三区和四区）此法多用于含菌量较多的粪便、脓汁等标本的细菌的分离培养。第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环（3）密集划线法此法用于纸片药敏实验培养密集划线法用于药敏实验细菌在固体培养基中生长表现：1、大小（mm表示。1mm以内露滴状；1-2mm小菌落。2--4mm中等大菌落；4-6mm以上称大菌落或巨大菌落）2、形状（圆形、不规则形）3、边缘（整齐、锯齿状）

4、4、表面性状（光滑、粗糙、）5、隆起度（扁平、隆起、中凸）6、颜色及透明度（黄色、灰白、光泽、透明）7、硬度（干燥、湿润、粘液）8、溶血（在血培养基上的表现）试管培养基接种法琼脂斜面接种法该法主要用于纯种增菌及保存菌种，也可用于某些生化鉴定试验如双糖铁培养基的接种。斜面培养基正面图侧面图手执塑料杆处小指夹棉塞试管口离火焰1cm手执试管底露出斜面操作顺序：接种环灭菌勾取细菌取棉塞接种塞棉塞接种环灭菌标记培养。细菌分离培养选择适合细菌生长的条件和温度按无菌操作选择适合细菌生长的培养基接种量少革兰氏染色法步骤一般包括初染、媒染、脱色、复染1

5、）涂片干后加热固定。2）结晶紫染30s，水洗3）加碘液约30s，水洗4）加95%酒精数滴，摇动脱色，30秒-1分钟，至无紫色脱落为止，水洗5）加复红染色染，染30秒后，水洗。干燥，镜检。+C鉴定思路乳糖-触酶+微球菌科O/F试验氧化型微球菌属h2o2+触酶-链球菌科血浆凝固酶-新生霉素敏感试验S表皮葡萄球菌O/F试验发酵型葡萄球菌属血浆凝固酶+金黄色葡萄球菌新生霉素敏感试验R腐生葡萄球菌Mac生长试验阳性肠链球菌属靛基质-Mac生长试验阴性α溶血OptochinS为肺链R为甲链β溶血杆菌肽S为A群链CAMP试验+为B群链-b鉴定思路乳

6、糖-OX+双糖-非发酵菌科鞭毛染色-为黄杆菌属莫拉菌属h2o2+OX–双糖+肠杆菌科端鞭毛为假单胞一根鞭毛为绿脓周鞭毛为产碱杆菌动力-NIT-不动杆菌动力+NIT+嗜麦牙单胞菌IMVC++--为大肠-++为产气和肺克+-+为沙门D+--为志贺PD葡萄糖酸盐Ox-双糖-非发酵菌科Ox+双糖发酵型弧菌科0/129R为气单胞菌S为弧菌属和霍乱弧菌实验安排：每人一个营养琼脂平皿做划线分离，要求分出单个菌落。（培养时倒置）每人一支营养琼脂斜面做斜面接种。感谢聆听！