青蒿琥酯诱导HL60细胞凋亡的研究

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1、青蒿琥酯诱导HL60细胞凋亡的研究作者：刘俊玲，虞荣喜，陈均法【摘要】　　本研究旨在研究青蒿琥酯体外诱导HL60细胞凋亡及其过程中Bcl2与ICAD蛋白表达的变化。采用MTT法测定青蒿琥酯对HL60细胞的生长抑制作用；用光学显微镜检、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术观察和检测青蒿琥酯诱导HL60细胞的凋亡；应用蛋白印迹法检测青蒿琥酯诱导HL60细胞凋亡过程中Bcl2与ICAD的表达变化情况。结果表明：青蒿琥酯对HL60细胞有明显的生长抑制作用，并呈时间、剂量依赖性。48小时IC50值为μg/ml，其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关；Bcl2和ICAD在HL60

2、细胞中均有表达，且随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论：青蒿琥酯可诱导HL60细胞凋亡，Bcl2和ICAD在青蒿琥酯诱导HL60细胞凋亡的信号传导途径中可能是重要的调控因子。【关键词】青蒿琥酯　HL60细胞系　细胞凋亡ApoptosisofHL60CellsInducedbyArtesunateInVitroAbstractThestudywasaimedtoinvestigatetheeffectofartesunate(ART)ontheapoptosisofHL60cellsinvitroandtheexpressionofBclandICADinth

3、eprocessofapoptosisinducedbyART.TheinhibitionofARTonHL60cellswereevaluatedbymeansofMTTassay;cellapoptosiswasdetectedbylightmicroscopy,agarosegelelectrophoresis,flowcytometry;WesternblotwasusedtoanalyzetheexpressionofBclandICADincellsduringapoptosisinducedbyART.TheresultsshowedthatARTco

4、uldsignificantlyinhibittheproliferationofHL60cellsintimeanddosedependentmanner.AftertreatingHL60cellswithARTforhours,theIC50valueswasμg/mlanditsinhibitioneffectcontributedtotheinducedapoptosis.BclandICADprotEinsbothallexpressedinHL60cells,thelevelofexpressiondeclinedasconcentrationi

5、ncreased.ItisconcludedthatartesunatemayinduceapoptosisofHL60cellsinvitro,BclandICADmaybeanimportantcontrolfactorinthesignaltransductionpathwayofARTinducedapoptosis.Keywordsartesunate;HL60cellline;apoptosis青蒿琥酯，是具有倍半萜内酯类抗疟药青蒿素的衍生物，其除具有高效抗疟作用外，对多种肿瘤细胞均有诱导凋亡作用［1，2］。本研究观察了青蒿琥酯对HL60细胞的凋亡诱

6、导作用及凋亡过程中bcl2和ICAD的表达情况，以便为青蒿琥酯作为抗白血病药物应用于临床提供理论基础。材料和方法药物和试剂注射用青蒿琥酯为桂林南药股份有限公司产品，批号041101，5%碳酸氢钠1ml溶解后，用RPMI1640配制所需浓度；碘化丙啶、噻唑蓝为Sigma公司产品；细胞凋亡DNALadder提取试剂盒购自北京博大泰克生物基因技术有限公司；bcl2和ICAD单克隆抗体均为美国SantaCruz公司产品。细胞系及细胞培养急性早幼粒细胞白血病细胞株HL60由浙江大学医学院附属第二医院肿瘤研究所提供。细胞按常规悬浮细胞培养法培养于含10%热灭活小牛血清的RPMI

7、1640培养液中，置37℃、5%CO2培养箱中培养。每2-3天传代1次，取对数生长期细胞进行实验。MTT测定取对数生长期细胞，调整细胞浓度至1×105/ml，接种于96孔板，每孔100μl，青蒿琥酯终浓度分别为1、2、4、8、16、32、64及12μg/ml，每孔100μl，设空白对照组。药物分别作用24、48、72小时后，每孔加MTT0μl，于37℃、5%CO2培养箱中培养4小时，离心弃去上清液，每孔加入DMSO150μl，振荡摇匀，在570nm酶标仪上测吸光度值，计算抑制率，求半数抑制浓度IC50。细胞抑制率=×100%细