米非司酮诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡机制的研究

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1、米非司酮诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡机制的研究【摘要】　　目的探讨米非司酮对人宫颈癌Hela细胞的凋亡诱导作用及作用机制。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞，流式细胞技术分析不同浓度米非司酮对Hela细胞凋亡率及细胞周期分布的影响，用Westernblot法检测米非司酮对Hela细胞中NF-κBp65蛋白表达水平的影响。结果、10、20μmol/L的米非司酮均能使Hela细胞凋亡率明显增加，使S期、G2/M期细胞比例减少，G0/G1期细胞比例显著增加，且作用呈剂量依赖性；随着米非司酮浓度的增加，Hela细胞中NF-κBp65蛋白表

2、达水平逐渐下降。结论米非司酮可能通过NF-κB信号通路下调NF-κBp65蛋白表达，从而调节细胞周期，诱导Hela细胞凋亡。【关键词】人宫颈癌；Hela细胞株；米非司酮；凋亡；细胞周期；NF-κB；p65Abstract:ObjectiveToinvestigatetheregulatoryeffectofmifepristoneonthecellapoptosisofhumancervicalcancercelllineHelaandtheunderlyingmechanisms.MethodsHumancervicalcan

3、cercelllineHelawasculturedinvitro.Flowcytometryanalysistechniquewasusedtodeterminethechangesofcellcycledistributionandcellapoptosispercentageaftertreatmentwithdifferentconcentrationsofmifepristone.Westernblotwasperformedtoexaminetheeffectofmifepristoneontheexpression

4、ofNF-κBp6protEinofHelacellline.Results,10and0μmol/LmifepristonesignificantlyincreasedthecellapoptosispercentageandtheproportionofcellsinG0/G1phaseofHelacellsanddecreasedtheproportionofcellsinSandG2/Mphasesinadose-dependingmanner.Withtheincreaseofmifepristoneconcentra

5、tions,theexpressionofNF-κBp6wasgraduallydownregulatedinHelacells.ConclusionMifepristonecanregulatecellcycledistributionandacceleratecellapoptosisbydownregulatingtheexpressionofNF-κBp6protEInincelllineHelaviaNF-κBsignalingpathway.　　Keywords:humancervicalcancer;celllin

6、eHela;mifepristone;apoptosis;cellcycle;NF-κB;p65　　米非司酮(mifepristone,MIF)是人工合成的抗孕激素药物，目前在临床上主要用于终止早孕、引产等。近年研究发现，米非司酮还具有抗肿瘤、增强抗癌药物疗效等其他临床新用途。核因子－κB(nuclearfactorofkappabinding,NF-κB)是一种具有多向调节功能的核转录因子，参与细胞的增殖、凋亡和癌基因的转录调控的信号传递过程，并被证实和宫颈癌的发生发展密切相关［1-2］，NF-κBp65则是NF-κB在体内发

7、挥生理功能的主要亚单位之一。本实验的目的是研究不同浓度的米非司酮对人宫颈癌Hela细胞生长及对NF-κBp65蛋白表达的影响，探讨米非司酮对宫颈癌的治疗作用及其可能的作用机制，为宫颈癌的防治寻找新途径。　1材料和方法材料人宫颈癌Hela细胞株，米非司酮纯粉剂，DMEM干粉，碘化丙啶(PI)、MTT，NF-κBp65抗体。方法细胞培养常规复苏冻存的人宫颈癌Hela细胞，接种于盛有DMEM培养液的培养瓶中，在37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱内培养，隔日更换新培养液一次。平均3～4天传代一次。实验分组将培养的Hela细胞随机分为用药

8、组和对照组。用药组：分为3组，分别含有浓度为5、10、20μmol/L的米非司酮，各组DMEM培养液中乙醇终浓度小于%，含有7%胎牛血清。对照组：培养液中不含米非司酮，只含与用药组相同浓度的乙醇和胎牛血清。实验方法流式细胞技术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡率取