广州地区汉族人群肺癌易感性标记物CYP1A1、CYP2E1和GSTM1与肺癌关系的病例对照研究

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1、广州地区汉族人群肺癌易感性标记物CYP1A1、CYP2E1和GSTM1与肺癌关系的病例对照研究作者：王德全　陈思东　汪保国　蔡旭玲　冼雪珍【摘要】　　［目的］探讨广州地区汉族人群谷胱苷肽硫转移酶、细胞色素P4501A1和细胞色素P450E1基因多态性与肺癌易感性的关系。［方法］选取中山大学附属第一医院、广州市肿瘤医院、广州市红十字会医院等医院的广州籍新发肺癌病人91例及同期上述各医院的同性别非肺部疾患病人91例作对照，采用聚合酶链式反应和限制性片段长度多态性技术检测CYP1A1、CYP2E1和GSTM1的基因多态性

2、。［结果］与野生型的CYP1A1相比,突变型肺癌OR为(～),CYP2E1C2C2基因型与C1C1基因型比较，其OR为(～)，GSTM1基因缺失型的OR值为，而三者联合作用时，则可增加患肺癌的危险，其OR值为(～)，但无统计学意义。［结论］CYP1A1、CYP2E1和GSTM1的某些基因型增加了患肺癌的危险性，但尚未达到统计学的显著性水平,说明它们均不是肺癌个体易感性的主效基因，而是次效基因。【关键词】基因多态性　肺肿瘤　病例对照研究　　1材料与方法研究对象病例来源于广州市肿瘤医院、广州市红十字会医院、中山大学附属

3、第一医院等XX年至XX年广州籍新发肺癌病人91例，其中男性60例，女性31例。年龄22岁~84岁。对照组1：1匹配来源于同期同一医院非肿瘤非肺部疾患的病人，性别相同，年龄±2岁。对照组91例，其中男性60例，女性31例，年龄最小22岁，最大82岁。两组间的年龄和性别的分布差异无显著性。1.样本的采集采集实验对象的静脉血8ml~10ml，于4℃冰箱静置分离血清及血凝块，取血凝块于-70℃冰冻保存。的制备新鲜血凝块或冰冻血凝块室温解冻后，采用DNA酚抽提方法提取DNA。基因型的检测引物序列：5′?鄄CAGTGAAGAG

4、GTGTAGCCGCT?鄄3′和：5′?鄄TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT?鄄3′，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。PCR反应体积及反应条件：μl，10×μl，dNTPsμl(μmol)，引物2种各μl(μM)，Taq酶μl，模板μl。94℃预变性2min，然后用94℃50s、54℃50s、72℃60s，进行30个循环，最后72℃7min。PCR扩增产物用MSPI酶切：扩增产物10μl，MsPI内切酶1μl，10×Bufferμl，ddH2Oμl1000g，离心数秒，加石蜡25μl，37℃水浴1~

5、3h，65℃水浴10~15min终止酶切，取8μl酶切产物点样用1.%琼脂凝胶作电泳分析。结果判断：野生型为340bp，突变型140，200bp个片段，杂合型为140，200，340bp个片段。基因多态性检测引物设计：CYP450E1PstI/RsaI型引物：5′?鄄CCAGTCGAGTCTACATTGTCA?鄄3′，5′?鄄TTCATTCTGTCTTCTAACTGG?鄄3′。PCR反应条件：μl，10×μl，dNTPsμl(μmol)，引物4种各μl，Taq酶μl，模板μl。94℃预变性2min，然后用94℃50

6、s、54℃50s、72℃60s，进行30个循环，最后72℃7min。PCR扩增产物的酶切:总体积15μl：扩增产物10μl，RsaI内切酶1μl，10×Bufferμl，ddH2Oμl1000g，离心数秒，加石蜡25μl，37℃水浴1~3h，65℃水浴10~15min终止酶切，取8μl酶切产物点样用%琼脂凝胶作电泳分析。结果判断：PCR产物长度为410bp，经RsaI酶切后，在紫外光下可见三种情况：①出现360bp和50bp的两条亮带，此为C1C1野生型纯合子；②只出现410bp的亮带，此乃C2C2突变型纯合子；③

7、若出现上述的全部三条亮带，此为C1C2杂合子。基因多态性检测两对引物分别特异性扩增GSTM1基因片断及参照基因β?鄄globin，由上海生物工程公司合成。PCR扩增ddH2Oμl，10×μl，dNTPsμl(μmol)，引物4种，各μl，Taq酶μl，模板μl。94℃预变性2min，然后用94℃50s、54℃50s、72℃60s，进行30个循环，最后72℃7min。琼脂扩电泳检测取10μl反应物加样于%琼脂扩凝胶，电泳30min，1%溴化乙锭染色，紫外光下可见PCR扩增的相应大小DNA片段的荧光带，即可判定结果。结

8、果判定扩增产物分为2个基因型，GSTM1紫外光下可见2条电泳带，即268bp和215bp，GSTM1仅可见268bp带。1.数据统计分析所有资料以FOXPRO建立数据库，用软件包进行统计分析。结果.1CYP1A1基因型与肺癌风险关系分析MSPI识别的CYP1A1基因有三种类型，即突变型、杂合型、野生型。它们在病例组的携带率见表2。.CYP2E1基因多态的频率