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1、细胞系的生命期原代培养Primaryculture原代培养Primaryculture概念从体内取出组织细胞开始培养到 第一次进行传代之前的时期 一个特征性的必然的生长阶段。完成了从体内环境到体外环境的过渡和适应过程，恢复了分裂增殖与生长发育的能力含义:包含)①原代培养实质是初次培养，即培养物接种到培养器皿 中就不再分割，任其生长繁殖②原代培养中的“代”并不是指细胞繁殖的“代”数③原代培养过程中不分割培养物不等于不更换培养液建立方法:组织块法,分散(细胞悬液）法时间:一般~4周(代：细胞自接种至新培养皿中至其下一
2、次再接种传代的时间为细胞的一代)特点(1)性质①性状似体内可表达某些形态、结构、功能,更能 代表活体细胞最接近在体时的情况②细胞异质性细胞成分混杂，除目的细胞之外， 其它各种细胞还存在③细胞活跃移动，分裂不旺盛④相互依赖性强独立生存能力差,不易单个培养特点(2)发展过程:调整组成原代培养的产生--选择结果:形成相对均一的细胞系选择第一步:形成原代培养的基础组织块:能迁移出的消化分散:操作中能生存、附着能悬浮生存特点-发展过程选择第二步:时间：数小时后至铺满(汇合confluence)变化：数小时后至进一步选择中3
3、种情况:能增殖 能存活 不能存活 细胞类型,继续改变,至铺满(铺满:贴附生长的细胞在培养器皿中生长达到一定数 量彼此连接成单层长滿器皿底壁)特点-发展过程选择第三步:时间：铺满(汇合confluence)后(可用于生长区域已被利用)变化：通过密度抑制密度抑制敏感的细胞(如正常细胞)密度抑制敏感低的细胞(如永生性细胞)特点-发展过程需及时传代传不传代及何时传代 根据： 接种的细胞数量 培养瓶皿的大小 培养条件在一定程度上具有可人为操作的特征传代期--细胞系Subculture--Cellline传代期--细胞系Ce
4、llline概述将原代培养物经过分割，重新接种到两个或两个以上的器皿内进 行培养，进入传代培养期整个培养过程的主要时期原代培养物----要经过反复传代 传代培养期 并不单指原代培养物经首次传代 后的“第一代”培养过程 而是指由首次传代开始经反复传代一直到培养物 开始衰退之前的全部时间传代：细胞生长繁殖一段时间，到达一定细胞密度后，就应将细胞分离成二或 几部份至新的培养器皿并更新补充培养液，使之继续繁殖生长，即传代。经过传代即称为细胞系细胞系可以继续传代传代培养期就是维持细胞系增殖、生长的培养过程传代培养期的长短：
5、培养的细胞种类供体年龄大小一般是有限细胞系特点细胞分裂增殖活动旺盛，细胞生长活跃细胞群体在调整：每次传代,调整-因增殖能力、耐受力差异增殖能力较强的细胞渐处于优势其它逐渐淘汰传代培养早期，细胞尚能保持二倍体核型随着传代次数增加细胞发生转化的概率增大能维持的代数一般是有限细胞系种族(主要):成纤维细胞 人,50;猴,40;鸡,37;鼠,8部位:人:胚肺50±10;肾8~19猴:肺5;肾20;耳40条件:如表皮细胞+EGF从50代 增加至150年龄传代的频率原则上 贴壁生长将长满培养罪皿的生长面(器皿的底壁)悬浮培养
6、下细胞密度足够大 具体时间并没有定时，根据具体情况，但提前或过晚(尤以后者)都不合适一般:数天~一周因素:接种细胞数量:量大-快接种细胞性质:细胞系比原代-快培养液:高血清-快意义生物学意义:形成较均一的细胞实际意义:优点:可传代,有特征,数目多,均一性,可冻存缺点:遗传学可改变,失去分化衰退期Senescencephase衰退期Senescencephase概述仍生存,但基本不增殖-衰退,死亡传代培养到一定的代数时，细胞的生命活动明显减弱。细胞虽然生存，但生长缓慢、 很少分裂增殖甚或不再分裂，即使及时换液也无效
7、表明培养物已经进入衰退期，再向前发展，只有退化、死亡特点:细胞系的生命期--归宿有限细胞系:一般衰退、死亡转化:永生化:--连续细胞系自发性转化诱导转化永生化端粒端粒在真核细胞染色体两端功能：保护染色体的稳定性和完整性以维持DNA完整复制 生理情况下---细胞分裂---染色体端粒丢失---至一定程度--- DNA复制不进行---停止分裂∴正常细胞---增殖潜能有限---若干代分裂后---有限细胞系瑞拉酶端粒的长短肿瘤细胞与正常体细胞不同，瑞粒不随分裂-变短保证此特殊-机制-端粒酶端粒酶可催化、合成并维持瑞粒一定的
8、长度其激活可使细胞-无限增殖能力肿瘤细胞：端粒酶活性高端粒长 无限增殖自发性转化:偶而,个别通过危机--转化培养的细胞，由于尚不明确的原因---使培养的细胞发生自发的转化 转化细胞的性状可传递给予代细胞来源细胞:2种可能转化因素:种族来源正常细胞:人0;鸡0;鼠较易9/11诱导转化诱导因素:化学、幅射、病毒等诱发培养细胞的转化因素凡能改变DNA(基因)结构的因素都可能成为
