发酵液中植酸酶活性测定方法研究

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1、发酵液中植酸酶活性测定方法的研究摘要：以钒钼法对发酵液中植酸酶活性进行了测定，并对影响酶活性测定结果的因素进行了研究。实验结果表明，钒钼法测磷的灵敏度和线性范围分别为0.025mmol/L和0.025mmol/L~0.60mmol/L；为减小植酸酶活性的测定误差，结果测定必须在颜色反应结束后的4h以内完成。研究中同时发现，发酵液含有的无机磷远远大于酶活测定产生的无机磷含量，直接用发酵液测得的植酸酶酶活是不可靠的。通过对透析2h的发酵液进行植酸酶酶活的测定，实验结果的最大相对偏差仅为7.1%。关键词：钒钼法；植酸酶；透析

2、；酶活StudyonanalysismethodsofphytaseactivityinfermentationbrothAbstract:Determinationofphytaseactivityinfermentationbrothbyvanadiu-molybdenummethodandthefactorsinfluencedresultswerestudied.Theresultsshowedthatthesensitivityandlinearrangeforinorganicphosphorusbyvan

3、adiu-molybdenummethodwere0.025mmol/Land0.025-0.60mmol/L,respectively.Detectionmustbefinishedwithin4haftercolourreactionfordecreaseoferror.Itwasalsofoundthatconcentrationofinorganicphosphorusinfermentationbrothwasmuchhigherthanthatofproducedbyenzymeactivityanddet

4、erminationofphytaseactivitydirectlywithfermentationbrothwasnotreliable.Therelativestandarddeviationoftheresultswas7.1%whenthefermentationbrothwasdialysedfor2h.Keywords:vanadiu-molybdenummethod;phytase;dialysis;phytaseactivity收稿日期：2009-12-24基金项目：泰山医学院青年科学基金项目（200

5、8-2009）作者简介：洒荣波（1978-），男，讲师，研究方向为微生物发酵。phenotypesandreceptorstructure[J].Yeast，2004，7(6)：559-574.[9]FUJIIT,HORICY.Furtherinvestigationonasubstanceisolatedfromwortinducingearlyflocculation[J].RepResLabKirinBrewCo,1975,18:75-85.[10]FUJINOS,YOSHIDAT.Prematurefloccu

6、lationofyeastinducedbysomewortconstituents[J].RepResLabKirinBrewCo,1976,19:45.!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!分析与检测·167·2010No．4SerialNo．217ChinaBrewing植酸酶活力测定的准确性是保证植酸酶研究和生产顺利的基础，关于植酸酶测定方法的报道很多，主要采用比色法，但其一直存在着误差大、不能准确定量的问题[1-4]。目前测定

7、植酸酶活力应用较广的有4种方法：钼酸铵-FeSO4法、钼酸铵-VC法、钼酸铵-氨基奈酚磺酸法以及钒钼法。其中钒钼法于1994年被美国分析化学专家列入AOAC（Associ-ationofAnalyticalCommunities）标准方法，我国也于2002年将钒钼法作为测定饲用植酸酶活性的国家标准[5]。本研究优化所得到的植酸酶发酵培养基配方中含有3g/L的磷酸盐[6]，磷酸盐的作用不仅是提供酵母生长所需的磷源，更重要的作用是调整发酵液的pH值，有利于毕赤酵母的生长。但此浓度的磷酸盐在发酵过程中并没有被全部消耗掉，毕赤

8、酵母生长所吸收的磷只占其中的一部分。由此对如何降低发酵液中无机磷对植酸酶活力测定的干扰并进而提高植酸酶活力测定的准确性进行了初步研究。1材料与方法1.1菌株巴斯德毕赤氏酵母PichiapastorisKM71（his4arg4aox1::ARG4）、表达载体pPIC9k为Invitrogen公司产品，外源基因为精糙脉孢菌（Neur