改进检测人类性染色质的方法

《改进检测人类性染色质的方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、改进检测人类性染色质的方法【关键词】性染色质　　【Abstract】AIM:Toimprovethedetectionmethodofhumansexchromatin.METHODS:Humanbuccalmucosalcellsaterials,theoperationofcentrifugaldroppingslideprovedandtheconcentrationlevelssaandAceticgentianviolet(AGV).Coverdyedmethodployedinstaining.RES

2、ULTS:EqualizedBarrBodyFrequency(BBF)plesthathadbeendyedrespectivelybyThionin,GiemsaandAceticgentianviolet(20.3±1.4)%,(19.5±1.5)%and(20.0±1.0)%respectively.CONCLUSION:Theapplicationoftheimproveddetectingmethodofhumansexchromatinenablesustodetectsexchromatinimm

3、aculately.、　　【Keyatin;dye;detectionmethod　　【摘要】目的：改进检测人类性染色质的方法.方法：以人类口腔黏膜细胞为材料，改进离心滴片法操作流程，改变三种染液硫堇、吉姆萨、冰醋酸龙胆紫的浓度，用扣染法进行染色.结果：改进后的检测效果好，三种染液硫堇、吉姆萨、冰醋酸龙胆紫所染出的性染色质出现率均等，分别为(20.3±1.4)%,(19.5±1.5)%,(20.0±1.0)%.结论：应用改进的人类性染色质检测方法，可以准确检出性染色质.　　【关键词】性染色质；染液；检测方法　　0

4、引言　　检测性染色质失败的原因，除了主观上因素外，检测本身也存在一些问题，例如细胞没有分散开而出现的重叠现象，或是染色过深以至性染色质与核内其他物质不易区分，影响镜检效果.根据以上情况，对人类性染色质检测做了三个方面的改进：①制片方法；②染液的最佳浓度；③染色方法.　　1材料和方法　　1.1材料　　取年龄段在21~22岁女性大学生18人，取其口腔黏膜细胞做实验材料.在原有的离心滴片法的基础上，增加解离过程，以松软细胞，利于滴片和染色.先解离后固定，解离和固定都在离心管中进行，用以加强解离的程度和防止细胞损失.受检

5、者漱口后，用牙签轻轻刮取两侧颊部内侧的黏膜，弃去第1次刮取到的黏膜细胞，在同一部位连续刮取数次，将刮取的细胞涮入装有生理盐水3mL的刻度离心管中，以1000r/min离心10min，弃去上清液.加入1mol/L盐酸3mL，用乳头吸管将细胞团轻轻打散，制成悬液，37℃解离20min，以1000r/min离心10min，弃去上清液.加入新配制的卡诺固定液（甲醇∶冰醋酸，V∶V＝3∶1）3mL，用乳头吸管将细胞团轻轻打散，制成悬液，室温下固定10min，再次打散细胞团后，继续固定20min.离心前将细胞打散，以1000

6、rmin离心10min，弃去上清液，根据细胞的多少加0.1~0.2mL新配制的卡诺固定液，将细胞打散，制成悬液.用乳头吸管取细胞悬液，滴于冰水浸过的载玻片上，自然晾干后，染色.　　1.2方法　　采用吉姆萨（Giemsa）、硫堇（Thionin）和冰醋酸龙胆紫（AGV）三种作为人类性染色质检测染色的染液，改进后的染液浓度均低于原先浓度.吉姆萨染液以吉姆萨原液与pH为6.8的磷酸缓冲液体积比为1∶19配成；硫堇染液以硫堇母液与蒸馏水体积比为1∶3配成；冰醋酸龙胆紫染液以冰醋酸龙胆紫母液与蒸馏水体积比为1∶3配成.人类

7、性染色质检测常把染液滴到制备好的片子上进行染色，这种片子背景上常会残留染液杂质,直接影响镜检，因此改进为扣染法染色.性染色质位于核膜内面，着色较核内其他易染质深，轮廓清楚；大小约为1.0~1.5微米；形状多呈三角形或半圆形；形态相似但不依附于核膜内面的，虽很可能是性染色质，但为避免与核内其他易染质混淆，故均不计入.凡是核固缩皱褶变小、核膜缺损、染色过深、染色质颗粒粗大成团或有杂质附着、胞核重叠等均不作为可数细胞计数.　　统计学处理：数据以x±s表示，采用SPSS11.0软件进行统计学描述.所用统计方法为t检验和方

8、差分析.　　2结果　　改进后的离心滴片法所制的玻片上细胞数量多，细胞较少重叠，解离程度好，在高倍镜下观察，细胞核与细胞质区分明显，核质均匀，核内及周围较少杂质分布，可计数细胞多，易镜检到标准形态的性染色质.按照原有方法染色，不能得到理想的效果，不是染色过深，就是细胞核与细胞质对比不明显，可能是由于染液浓度过高或是染色时间不适所造成.因此在改进染液浓度的基础上选择出最佳染色