水通道蛋白1和4在挫伤肺组织中的表达变化

《水通道蛋白1和4在挫伤肺组织中的表达变化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、水通道蛋白1和4在挫伤肺组织中的表达变化　　肺挫伤是创伤病人中常出现的一种闭合性损伤，创伤导致的肺组织出血、水肿是急性呼吸窘迫综合征的主要危险因素，老年患者由于身体各项功能都出现衰退趋势，加上基础疾病较多，因此病情更加复杂、凶险，显著加大了救治难度〔1〕，早期采取有效措施减轻肺水肿对于改善患者预后具有重要意义〔2，3〕，研究肺挫伤水肿的机制，对于肺挫伤患者的临床治疗具有重要的指导意义。本研究检测水通道蛋白(AQP)1和4在挫伤肺组织中的表达变化，探讨肺水肿的形成机制。　　1材料和方法　　1.1肺挫伤模型制作及分组　　　　健康老年雄性SD大鼠100只，体重450～500g，由昆明医科大学

2、实验动物中心提供。肺挫伤模型采用金属球自由落体打击法制作，老年大鼠麻醉后放置于水平实验台上，180g重物自1m高处自由落体，垂直撞击于大鼠右侧胸廓，于设定时间点麻醉后断头处死，分为四组:假手术组，模型1、3和6h组，每组25只，其中10只做水含量测定，10只做分子生物学检测，5只做组织病理检测。　　1.2肺组织含水量的测定　　　　大鼠麻醉后取肺组织，称量右肺中叶肺组织湿重，后置于100℃恒温鼓风干燥箱中干燥2d后称重，计为干重。根据下列公式计算肺组织水含量:(湿重－干重)/湿重100%。　　1.3肺组织HE染色　　　　取大鼠右肺上叶组织，4%多聚甲醛固定后，切片，常规脱水、脱蜡，行HE

3、染色。　　1.4RT-PCR　　　　根据标准的RNA提取步骤提取总RNA，使用反转录试剂盒(Promega)进行反转录，具体操作根据说明书进行。利用琼脂糖凝胶电泳检测各组AQP1和4的表达，以β-ac-tin作为内参照，ImageJ软件定量分析各电泳条带的灰度值，RT-PCR产物以各样本目的基因与β-actin的灰度值进行比较，AQP1上游引物序列:5'-AAAGTGGCAAGGAAGGGACA-3';下游引物序列:5'-GCTGTGGATGTTGGGAAAGAG-3'。AQP4的上游引物序列:5'-TTGGACCAATCAT

4、AGGCGC3';下游引物序列:5'-GGTCAATGTCGATCACATGC-3';β-actin上游引物序列:5'-GAGAGGGAAATCGTGCGTGAC-3';下游引物序列:5'-CATCT-GCTGGAAGGTGGACA-3'。　　1.5g肺组织加入裂解液匀浆，冰上碾磨匀浆后，12000r/min离心10min取上清，BCA法蛋白定量，取蛋白样品50μg，电泳后转膜，5%的脱脂奶粉封闭1h，β-actin、AQP4和1抗体(均购自美国Santacruz公司)稀释液孵育(1∶200)，4℃过夜，

5、TBST洗膜，5%的牛奶稀释的辣根过氧化物酶标记的兔抗羊二抗，洗膜后，按照ECL说明书，1∶1配置发光工作液，凝胶成像仪成像。　　1.6统计学分析　　　　采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析及LSD-t检验。　　2结果　　2.1肺组织湿/干重比和病理改变　　　　模型1、3、6h组湿/干比重(0.9324±0.0796、1.5378±0.0713、2.3780±0.0713)显著高于假手术组(0.7991±0.0693)(P＜0.05)。模型3、6h组与模型1h组有显著差异(P＜0.05)、挫伤后1h组织肺泡腔内未出现明显水肿

6、液，3h后，光镜下见挫伤肺组织间质出现明显肿胀，肺泡壁毛细血管出现明显扩张、红细胞外漏、水肿明显，肺泡腔内出现少量水肿液;挫伤后6h，黏稠液体充满肺泡腔，肺泡间隔出现明显水肿，有大量炎性细胞浸润，假手术组未出现明显异常。　　2.2各组肺组织AQP1和4的mRNA和蛋白表达量　　　　与假手术组相比，模型3、6h组肺组织内AQP1和4mRNA和蛋白表达明显升高(P＜0.05)。与模型1h组比较，模型6h组有显著差异(P＜0.05)。见图1和图2，表1。【图略.表1】　　　　3讨论　　研究表明弥漫性肺泡损害、低氧血症、挫伤区肺组织的血水肿、通气与换气功能障碍时肺挫伤的主要病理生理机制〔4〕，

7、其中肺水肿是导致肺通气功能障碍的主要原因，引起肺组织水肿的原因主要有两方面:一方面，创伤直接破坏血管内皮和肺泡上皮的屏障完整性，使通透性增加〔5〕;另一方面，肺挫伤后继发性产生的炎性介质，活性氧残基导致肺泡水的清除能力明显降低〔4〕。水代谢异常显著降低了肺组织的顺应性和氧合功能，是影响患者预后的重要因素。　　研究证实AQP在肺挫伤后组织水肿形成中发挥重要作用，其中，AQP1在肺挫伤后组织中的表达量明显升高〔6〕，Verk-man等〔7〕在敲除A