toll样受体2、9mrna在感染性早产患者外周血单个核细胞的表达及意义

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1、Toll样受体2、9mRNA在感染性早产患者外周血单个核细胞的表达及意义董生凤1罗艳2王豫黔2（1遵义医学院附属医院妇产科贵州遵义563000）（2遵义医学院第五附属（珠海）医院妇产科广东珠海519000）【屮图分类号】R722.6【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）27-0067-02【摘要】目的探讨感染性早产患者外周血单个核细胞Toll样受体2、9mRNA的表达。方法收集31例早产患者部分胎盘胎膜组织行病理检查，根据病检分为早产感染组（17例）和早产非感染组（14例），门诊进行孕检的正常孕妇作为正常对照组（10例）。（1）采用酶联免疫吸附法测定血清屮的IL

2、-6水平；（2）应用实时定量PCR技术检测早产患者和正常对照组孕妇外周血单个核细胞TLR2、9的mRNA表达水平。结果（1）TLR2mRNA在早产感染组患者外周血单个核细胞的表达水平显著高于早产非感染组和正常对照组（P<0.05）;而TLR9mRNA在早产感染组、早产非感染组和正常对照组外周血单个核细胞的表达水平无差异（P>0.05）；（2）早产感染组患者血清屮IL-6水平明显高于早产非感染组和正常对照组，差异有显著性（P<0.05）,但早产非感染组和正常对照组血清屮IL-6水平比较，差异无显著性（P〉0.05>;（3）感染性早产患者外周血TLR2mRNA的表达水平与血淸屮IL-6

3、水平呈正相关（r=0.778,P<0.01）而TLR9mRNA的表达与IL-6不存在相关关系（r=0.0355,P=0.162）。结论感染性早产患者外周血单个核细胞表面TLR2mRNA表达增强，提示TLR2参与了感染性早产的发生发展过程，其与血清中IL-6水平成正相关，可作为早期预测早产宫内感染的指标。【关键词】Toll样受体早产宫内感染早产是妊娠期常见的并发症之一，对围产儿的危害很大，全球发生率一直保持在5%-15%,其屮由感染引起的早产在临床上占到40%左右[1],感染因素在早产屮的作用越来越受到人们的重视。TLR2是一种介导先天性免疫的特异受体，它广泛参与炎症反应和免疫

4、应答，Kim[2]等通过免疫组化方法对胎盘组织的研宄发现，早产尤其是合并妊娠绒毛膜羊膜炎时TLR2表达量明显增加，提示TLR2可能通过炎症反应或是诱导细胞凋亡参与早产分娩发动。TLR9己经被证实是哺乳类动物细胞识别细菌DNA中免疫刺激序列CpG的受体，从而激活哺乳动物细胞天然免疫机制的发现,具右重要的生物学意义与成用价值起作用[3】。本研究通过检测TLR2、9mRNA在早产患者外周血单个核细胞的表达，探讨其与感染性早产的关系及在预测早产中的价值。1资料和方法1.1病例选择选择2007年5月至2007年10月在我院产科分娩的早产孕妇31例（孕周28—36周+6）,其中胎膜早破17例。

5、按病理学检查有无绒毛膜羊膜炎分为两组：早产感染组（即冇绒毛膜羊膜炎）17例；早产非感染组14例（即无绒毛膜羊膜炎）；另选取同期在我院围产保健门诊定期检查的同孕周正常孕妇（28—36周+6）10例作为对照组。1.1.1纳入标准凡符合以下标准者纳入本研究，孕周明确、单胎、分娩孕周为28-36+6周和（或）有胎膜早破、生殖泌尿道感染因素存在。经胎盘胎膜组织病理学检查有无绒毛膜羊膜炎再分为旱产感染组（17例），早产非感染组（14例）。对照组：门诊孕检孕周明确、单胎、无宫缩、追踪至37周内未分娩。1.1.2排除范围病理妊娠如：妊娠期高血压疾病、妊娠期肝内胆汁淤积症、前置胎盘、胎盘早剥、合并有

6、糖尿病、甲亢等内、外科疾病。1.1.3组织学绒毛膜羊膜炎的诊断标准在绒毛膜及羊膜组织中，中性粒细胞浸润每高倍镜视野〉5个，即为存在感染，可诊断为绒毛膜羊膜炎。绒毛膜羊膜炎往往伴发急性坏死性蜕膜炎，而且蜕膜炎的严重程度常超过绒毛膜羊膜炎[4】。1.2引物、试剂及仪器TLR2、9及β-actin引物由大连TakaRa生物工程公司合成。淋巴细胞分离液购自美国Sigma公司，总RNA提取液Trizol购于美国Gibco公司，RT-PCR所用酶及反应试剂盒购于大连TakaRa生物工程公司。实吋荧光定量PCR仪为美国Bio-Rad公司生产，凝胶成像图像分析仪为美国Syngene公司生

7、产，紫外分光光度计为美国Beckman公司生产。1.3方法1.3.1外周血单个核细胞（PBMCs）分离纯化抽取外周静脉血4ml,以lml肝素抗凝，加入等量的1640液，用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，重悬在含10%胎牛血清的完全RPMI1640中，置一8CTC冰箱保存。1.3.2细胞总RNA制备及逆转录cDNA采用Trizol一步法总RNA提取试剂盒提取外周血单个核细胞内总RNA,紫外分光光度计测定总RNA浓度及纯度，筛选OD260/OD280（R比值）比值为1