粗多糖检验方法 microsoft word 文档

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1、粗多糖的检验方法1、方法原理粗多糖在硫酸的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法测定样品在粗多糖含量。2、主要设备和仪器设备721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）试剂葡萄糖标准液：精确称取105℃干燥恒重的标准葡萄糖0.1000g，置100mL容量瓶中加热蒸馏水溶解稀释至刻度，其浓度为1.0mg/mL，用稀释成浓度为0.1mg/mLd的标准工作液。5%苯酚溶液：取苯酚100g，沙浴蒸馏，收集180℃-182℃溜分，称取此馏分5g，用水溶解后，定容至100mL棕色容量瓶中

2、备用（现用现配）。3、测定步骤3.1、最大吸收波长的选择精密吸取0.04mg/mL无水葡萄糖溶1.0粗多糖的检验方法1、方法原理粗多糖在硫酸的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法测定样品在粗多糖含量。2、主要设备和仪器设备721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）试剂葡萄糖标准液：精确称取105℃干燥恒重的标准葡萄糖0.1000g，置100mL容量瓶中加热蒸馏水溶解稀释至刻度，其浓度为1.0mg/mL，用稀释成浓度为0.1mg/mLd的标准工作液。5%苯酚溶液：取苯酚10

3、0g，沙浴蒸馏，收集180℃-182℃溜分，称取此馏分5g，用水溶解后，定容至100mL棕色容量瓶中备用（现用现配）。3、测定步骤3.1、最大吸收波长的选择精密吸取0.04mg/mL无水葡萄糖溶1.0粗多糖的检验方法1、方法原理粗多糖在硫酸的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法测定样品在粗多糖含量。2、主要设备和仪器设备721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）试剂葡萄糖标准液：精确称取105℃干燥恒重的标准葡萄糖0.1000g，置100mL容量瓶中加热蒸馏水溶解稀释至刻

4、度，其浓度为1.0mg/mL，用稀释成浓度为0.1mg/mLd的标准工作液。5%苯酚溶液：取苯酚100g，沙浴蒸馏，收集180℃-182℃溜分，称取此馏分5g，用水溶解后，定容至100mL棕色容量瓶中备用（现用现配）。3、测定步骤3.1、最大吸收波长的选择精密吸取0.04mg/mL无水葡萄糖溶1.0mL，置10mL具塞试管中，加入蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如加上法配制空白。用72

5、1分光光度计在470-510nm测定吸光度，测定最大吸收波长为490±nm。3.2、标准曲线的绘制精密吸收浓度为0.1mg/mL的葡萄糖标准标准工作液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，分别置于10mL具塞试管中，各加蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如上法配制空白。用721分光光度计，1cm比色皿，在490nm处测定吸光度，绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。结果浓度

6、在0.010-0.04mg/mL范围内与吸光度呈现性关系。回归方程Y=7.52×10-3X+1.13×10-3,Y=0.9997(n=6)。3.3、含量测定3.31、多糖的提取与精制取300mL，用氟仿多次萃取，以除去蛋白质，加活性炭1%脱色，抽滤，滤液加入95%乙醇，使含醇量达80%，静置过夜。过滤，残渣用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，真空干燥，即得粗多糖。3.32、供试液的配制精密称取粗多糖粉末0.2000g，置于50mL容量瓶中，定容，摇匀，即得供试品溶液。3.33、样品含量测定精密度吸取供试品溶液2.0mL

7、，按“标准曲线绘制”项下方法分别测定吸光度。结果计算：多糖含量（%）=（C·D）/V×100式中：C－供试液葡萄糖浓度（mg/mL）；D－代试液的稀释因素；V－供试液体积（mL）。粗多糖的检验方法1.范围本方法规定了保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在10000以上的水溶性粗多糖的测定方法。本方法适用于保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在10000以上的水溶性粗多糖的测定。本方法最低检出浓度：5.0mg/L。本方法最佳线性范围：5.0ug/mL—200ug/mL。2.原理食品中分子量>10000的高分子物质在80%

8、乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的水溶性多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其颜色强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以葡萄糖为标准参照物并以此计算食品中水溶性粗多糖含量。3．试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。3.1乙醇溶液