上海交通大学医学院附属仁济医院血管外科_张岚课件

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1、上海交通大学医学院附属仁济医院血管外科张岚静脉血栓栓塞症(VTE)发病率高、危害严重病因：遗传性、获得性（FVLeiden突变；AT、PC和PS抗凝蛋白缺陷）AT属于丝氨酸蛋白酶抑制物超家族中的一员，是人体抗凝系统中最重要的一种抗凝物质，约占抗凝系统总活性的70%432个氨基酸组成，相对分子量为58KDa反应位点区与肝素结合区分型I型主要表现为AT抗原（AT:Ag）和活性（AT:A）的同步减少，II型是由于AT结构异常所致。分为RS型（反应位点突变型）、HBS（肝素结合位点变异）和PE（多重变异）等3个亚型AT基因测序同源模建突变质粒构建蛋白免疫印迹ELISA激光共聚

2、焦显影红色箭头：先证者；阴影图形：突变携带者AT：Ag：0.19–0.31g/L；AT：A：75–125%c.134G>A箭头所示:突变碱基c.342T>G箭头所示:突变碱基自然界中蛋白质结构骨架的多样性远少于蛋白质序列的多样性蛋白质三维结构预测中最为可靠和实用的方法AT13位碱基与82位碱基在10类物种高度保守通过同源模建，可以将该区碱基进行任意的人为替换，通过软件分析系统计算出一系列静电力的变化情况，为进一步AT构象病的蛋白质功能研究提供理论基础同源性检测的目的突变体AT蛋白三维空间结构左下：Ser82Arg突变图右下：Arg13Gln突变图左图：AT-Arg13

3、（突变前）蓝色小球表示AT与肝素间的有效静电力右图：AT-Gln13（突变后）蓝色小球数量与色度均明显下降第13位碱基(AT-c.134G>A)突变后范德华力、静电力、总电能较突变前显著下降AT-Ser82Arg：突变后碱基与周围β折叠形成明显碰撞紫色区域显示：碱基与β折叠间的碰撞AT：Ser82Arg与周围原子基团产生碰撞；分子间静电力作用半径重叠；分子间距离缩短1：空白对照2：AT-wt3：AT-824：AT-135：AT-doubleWB显示：AT-82与AT-double细胞裂解中AT:Ag显著上升用3种不同质粒转染HEK293T分别检测细胞上清液与细胞裂解液

4、中的AT:Ag含量左图：双突变质粒转染细胞；右图：野生型质粒转染细胞目前已报道的AT突变分子机制ATMorioka（C95R）Cys21-Cys95间二硫键消失Ser82Asn额外糖基化Phe299Leu合成了一种不耐热的杂合性AT蛋白而导致AT缺陷13387-9delG、T98I和A404T突变AT蛋白分泌障碍和细胞内快速降解Leu99PheAT蛋白分泌障碍和细胞内滞留AT-c.134G>A&c.342T>G突变体AT在细胞内潴留AT-c.342T>G突变起主导作用