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时间：2018-10-20
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1、实验三凝胶过滤法分离蛋白质血红蛋白+高铁氰化钾高铁血红蛋白Mw=64500Mw=327.25黄色(过量)红褐色实验原理凝胶过滤法(分子筛层析/凝胶层析):凝胶——多孔凝胶颗粒(分子筛)：交联葡聚糖凝胶(SephadexG-25)PBS大分子不能进入凝胶颗粒内部，直接沿凝胶颗粒间隙流出，流程短，故先洗脱出来;小分子则扩散进入凝胶微孔，流程长，在柱内保留时间长，则后洗脱出来凝胶过滤法的分子筛效应G-25凝胶颗粒大分子小分子大分子凝胶颗粒小分子操作步骤凝胶准备（已完成）装柱（关开关）样品处理(3滴+8滴+2滴，已完成)上样(开关，加样0.2ml，开)洗脱(3cm)分部收集
2、（10滴/min,13滴/管）测定A425(+2ml蒸馏水，空白管)1.装柱后及洗脱时2.上样时柱床PBS(3cm)PBS(1mm)管编号A42512345678910洗脱图谱MetHbK3Fe(CN)61.装柱后要检查柱床是否均匀，若有气泡或分层的界面时，需要重新装柱。2.上样时滴管末端一定要靠近凝胶柱表面(1cm)、沿柱内壁缓缓滴加，不能冲击凝胶柱表面。样品上柱后应在凝胶柱表面形成一层薄液层。3.收集要及时，不能等红褐色物质流出之后再收集(13滴/管)。4.流速不可太快(约10滴/min)。5.洗脱过程中要防止凝胶柱洗脱液流干(3cm)。6.洗脱完成后凝胶要回收，勿丢
3、弃。注意事项思考题若洗脱图谱只出现一个峰，试分析可能的原因
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