亲和层析应用

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1、亲和层析的应用亲和层析亲和层析（affinitychromatography）是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从而达到分离目的的一类特殊层析技术。亲和层析法具有多方面的应用。核酸的纯化因为DNA与RNA之间具有专一性的亲和力，所以亲和层析可应用于核酸的研究，例如从大肠杆菌的RNA混合物中分离出专一于噬菌体T4的RNA，可将T4的DNA以共价键结方式接于cellulose材质的管柱中，再将所要的RNA分离出。此外，根据核酸与蛋白质之间交互作用的原理，可以将单股DNA接在Sepharose上，纯化DNA聚合酶或RNA聚合酶。激素受体的纯化激素受体是细胞膜上与特定激素结合的成份，

2、激素和受体的作用具有特异性，目前用亲和层析法已经能够将激素与sephrose的组合，纯化胰岛素、正甲状腺素的受体。抗体与抗原的纯化抗体与抗原结合具有高度专一性，Sepharose是这一类亲和层析较佳的载体，由于抗原-抗体复合物的解离常数很低，因此抗原在固定化抗体上被吸附后，要尽快将它洗出，冲洗液的条件通常是控制pH值至3以下，成份为醋酸、盐酸、Tris-HCl缓冲液、20%甲酸或1mol/L丙酸，也有使用尿素这一类的蛋白质变性剂作为洗出用的溶液。酶和酶的抑制剂纯化使用亲和层析法纯化酶，可以得到相当好的效果。例如，要分离猪和牛的胰蛋白酶，可以连接鸡卵黏蛋白（胰蛋白酶的抑制剂）与Sepharose

3、4B当作层析柱材质，用它纯化出来的胰蛋白酶相当于5次再结晶的纯度。除了使用抑制剂当配体，也可以反过来用酶作为配体来纯化抑制剂，例如，将胰蛋白酶接到Sepharose上，能有效分离纯化大肠杆菌中的胰蛋白抑制剂Ecotin。Chitin几丁质CHOM鸡蛋粘多糖蛋白Trypsin胰岛素亲和层析的应用亲和层析法分离胆固醇氧化酶季文明,陈毅力等江南大学生物工程学院亲和层析法分离胆固醇氧化酶胆固醇氧化酶是一种多功能酶。目前,医院应用胆固醇氧化酶检测血清胆固醇含量。胆固醇氧化酶可以降低食品中的胆固醇含量；能有效抑制鳞翅目昆虫的生长繁殖,是一种生物杀虫剂；胆固醇的氧化产物胆甾-4-烯-3-酮还具有抗肥胖、治疗

4、肝病等药效。亲和层析法分离胆固醇氧化酶发酵产物经过盐析操作以后，得到层析用样品。他们利用一种脂溶性凝胶SepherdexLH20作为胆固醇的载体,其分离的分子量小于3000。胆固醇也为脂溶性的化合物,与凝胶LH20有很好的相容性,而酶蛋白不能进入凝胶。亲和层析法分离胆固醇氧化酶他们每次进行实验时加入1~5ml的样品,用1~5倍体积的缓冲液A洗去杂物,流速为0.5~2ml/min；然后再用缓冲液B洗脱酶蛋白,流速为015~2ml/min。亲和层析法分离胆固醇氧化酶他们对表面活性剂的浓度和洗脱速度的条件进行了考察，得到用亲和层析分离纯化胆固醇氧化酶,酶比活从0.45U/mg提高到15.5U/mg。

5、亲和层析的适合条件为洗脱液A的流速是015ml/min,洗脱液B的流速是210ml/min。实验室内可用此法分离纯化胆固醇氧化酶,但是从实际操作和经济角度考虑，该法不适合大规模处理。谢谢大家！学习动物精神11、机智应变的猴子：工作的流程有时往往是一成不变的，新人的优势在于不了解既有的做法，而能创造出新的创意与点子。一味地接受工作的交付，只能学到工作方法的皮毛，能思考应变的人，才会学到方法的精髓。学习动物精神12、善解人意的海豚：常常问自己：我是主管该怎么办才能有助于更好的处理事情的方法。在工作上善解人意，会减轻主管、共事者的负担，也让你更具人缘。谢谢大家！