象耳豆根结线虫两个新基因（meactin和mehsp70）

《象耳豆根结线虫两个新基因（meactin和mehsp70）》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、象耳豆根结线虫两个新基因（MeActin和MeHsp70）象耳豆根结线虫两个新基因（MeActin和MeHsp70）的克隆与特性研究　　根结线虫（Meloidogynespp.）为植物根系内寄生物，可对农作物造成严重的危害。在国内约30多种根结线虫中，象耳豆根结线虫（M.enterolobiiYangandEisenback,1983）在海南岛已普遍分布，广东省也有发现。通过海南岛茄果类蔬菜根结线虫种类鉴定，发现该种群已进一步扩散，正在显示出取代南方根结线虫M.incognita，而成为我国热带亚热带地区最重要根结线虫种类的

2、趋势。近年来对该线虫的研究备受关注，但对于其功能基因及功能基因组等分子生物学研究报道很少。本研究以该线虫为材料，采用RT-PCR、cDNA末端快速扩增法（RACE），克隆得到M.enterolobii的Actin基因和Hsp70基因的全长cDNA序列，并对它们进行了生物信息学分析以及MeHsp70原核表达分析。主要研究结果如下：（1）MeActin基因全长cDNA序列为1298bp，包含一个全长1125bp的开放阅读框ORF，编码375个氨基酸，起始密码子在82位，终止密码子在1207位（GenBank登录号KF534787

3、），与已知的其它物种的Actin具有高度的保守性，与马铃薯腐烂茎线虫D.destructorto和松才线虫B.xylophilusActin的同源性分别为99.20%和98.67%，与秀丽隐杆线虫C.elegans、人类H.sapiens相似性分别达到98.67%和97.33%。系统发育分析表明，MeActin可能是β-Actin，同时也发现了MeActin与人类的胞质Actin（β-Actin）更相似。MeActin基因的分离为M.enterolobii其它基因的表达和调控研究提供了内参基因。（2）MeHsp70基因全长c

4、DNA序列为2203bp，含有1959bp的开放阅读框，编码653个氨基酸，相对分子量为71.09kDa，具有3段Hsp70家族的签名序列，GenBank登录号KF739434。同源性分析表明，氨基酸序列与其它真核生物的Hsp70序列具有很高的相似性。该Hsp70与其他物种中的Hsp70进行系统进化分析，结果显示，Hsp70的系统发育树不能体现物种间的亲缘关系，推测其反映的是不同物种间Hsp70生物学功能的相似性程度。生物信息学分析显示，MeHsp70基因所编码的蛋白质以亲水性区域为主，无信号肽，无跨膜区域，为非分泌型蛋白，

5、该蛋白的二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主，同时MeHsp70还存在卷曲螺旋结构。构建了pEASY-E1-MeHsp70和pET30a-MeHsp70原核表达载体，当IPTG终浓度为0.4-1.0mmol/L时，能诱导表达MeHsp70。从原核生物角度分析MeHsp70的特性，发现表达MeHsp70的原核细胞明显比对照耐受高温胁迫。MeHsp70基因的克隆和表达，将为M.enterolobii的生态适应性机理研究提供依据。关键词：象耳豆根结线虫；MeActin;MeHsp70；克隆；表达1象耳豆根结线虫研究进展M.entero

6、lobii最早于1983年由杨宝君等在海南儋州的象耳豆树上发现并鉴定和命名［1］，后经徐建华等证明国外学者广泛报道的玛雅根结线虫M.mayaguensis为M.enterolobii的异名［2］。M.enterolobii在全球农作物中已经成为一种经济上重要的寄生线虫[3-4]。近年来，M.enterolobii的迅速传播也引起了学者的广泛关注。2008年，欧洲首次报道M.enterolobii，同年，欧洲植物保护组织（EPPO）报道中国出口欧洲的玫瑰花上截获到该线虫，EPPO对该线虫进行风险评估，认为对中欧地区作物存在较大

7、威胁［5］。在国内，M.enterolobii近年来也陆续被报道，目前在海南岛已普遍分布，广东省也有发现［6］。据调查，在海南岛主要栽培作物葫芦科蔬菜、茄果类蔬菜、南药作物和热带果树均已发现有M.enterolobii广泛寄生[7]，同时M.enterolobii还可寄生携带Mi抗性基因的番茄和辣椒[8]。通过海南岛茄果类蔬菜根结线虫种类鉴定[9]，发现M.enterolobii种群已进一步扩散，正在显示出取代南方根结线虫，而成为我国热带亚热带地区最重要根结线虫种类的趋势。随着我国现代农业和设施农业的发展，温室和设施大棚不断

8、增加而导致土壤温度的上升，使得M.enterolobii入侵内陆地区成为可能，这将给全国的农作物生产带来威胁。近年来对M.enterolobii的研究备受关注，但对于其功能基因及功能基因组等分子生物学研究报道很少。2肌动蛋白简介在真核细胞中，肌动蛋白（Actin）是一种重要的收缩蛋白。Ac