溶液各种配制

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WORD格式可编辑附录：常用试剂配制及应用一、常用缓冲液、试剂的配制碳酸盐缓冲液(Carbonate-BicarbonateBuffer)由于碳酸盐pH值偏碱，因此，常用于pH>9的缓冲液配制（附表1）。附表1.0.2mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2～10.7）pH0.2mol/LNa2CO3(ml)0.2mol/LNaHCO3(ml)pH0.2mol/LNa2CO3(ml)0.2mol/LNaHCO3(ml)9.24.046.010.027.522.59.37.542.510.130.020.09.49.540.510.233.017.09.513.037.010.335.514.59.616.034.010.438.511.59.719.530.510.540.59.59.822.028.010.642.57.59.925.025.010.745.05.0磷酸缓冲液(PhosphateBuffers，PB)磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽。NaH2PO4：pKa1＝2.12，pKa2＝7.21；Na2HPO4：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32。另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶，因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为SDS会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用pH缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液pH值变化较小；④离子强度对缓冲液pH影响较小，如0.1mol/L缓冲液稀释10倍其pH变化小于0.1。磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（Ca2+）、镁离子（Mg2+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些生物化学反应专业技术资料分享 WORD格式可编辑过程，如对某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用。NaH2PO4的pH值偏酸性，可用作pH<4的缓冲液。Na2HPO4的pH值偏碱性，可用作pH>10的缓冲液。而pH＝6～8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要NaH2PO4与Na2HPO4两种磷酸盐混合配制（附表2）。附表2.0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.2）pH0.2mol/LNaH2PO4(ml)0.2mol/LNa2HPO4(ml)pH0.2mol/LNaH2PO4(ml)0.2mol/LNa2HPO4(ml)5.793.56.57.039.061.05.892.08.07.133.067.05.990.010.07.228.072.06.087.712.37.323.077.06.185.015.07.419.081.06.281.518.57.516.084.06.377.522.57.613.087.06.473.526.57.710.589.56.568.531.57.88.591.56.662.537.57.97.093.06.756.543.58.05.394.76.851.049.08.14.295.86.945.055.08.23.097.0磷酸盐缓冲溶液（Phosphate-bufferedsaline,PBS)磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.44gKH2PO40.24g专业技术资料分享 WORD格式可编辑在800ml蒸馏水中溶解，用HCl调节溶液的pH值至7.2～7.4加水定容至1L，15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存备用。Tris缓冲液（Tris-HClBuffer,TB）Tris的pH值偏于碱性，因此，通过添加HCl调节pH至所需值，Tris-HCl缓冲液的离子强度（mol/L）是专指Tris的浓度，如某一特定pH的0.05mol/LTris缓冲液的配制是将50ml0.1mol/LTris碱溶液与附表3所示相应体积（ml）的0.1mol/LHCl混合，加水至将体积100ml，即为0.05mol/LTris缓冲液。另外，按附表3制备的缓冲液，由于试剂来源的不同，缓冲液pH可能与所需略有差异，此时可通过稍许减少或增加HCl用量，精细调节pH至所需值。附表4.0.05mol/LTris缓冲液pH需0.1mol/LHCl（ml)pH需0.1mol/LHCl（ml)7.145.78.126.27.244.78.222.97.343.48.319.17.442.08.417.27.540.38.514.77.638.58.612.47.736.68.710.37.834.58.88.57.932.08.97.08.029.2Tris盐缓冲液（TBS）：Tris盐缓冲液是在Tris缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，TBS也适用于做细胞缓冲液，常用TBS配制如下。8gNaCl、0.2gKCl以及3gTris溶解于800ml蒸馏水中，加入0.015g酚红并用HCl调pH至7.4用蒸馏水定容至1L，分装后在15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存。专业技术资料分享 WORD格式可编辑现在常用Tris盐缓冲液通常不加pH指示剂，而且该溶液如果不用于细胞培养，通常不加KCl及酚红。Hank’s液(Hank’sBalancedSaltSolution)Hank’s液是一种平衡盐溶液，主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗等。贮存液A液：(I)NaCl80gKCl4gMgSO4·7H2O1gMgCl2·6H2O1g用双蒸馏水定容至450ml。(II)CaCl21.4g(或CaCl2·2H2O1.85g)用双蒸馏水定容至50ml。将I和II液混合，即成A液。贮存液B液：Na2HPO4·12H2O1.52g，KH2PO40.6g,酚红0.2g,葡萄糖10.0g,酚红应先置研钵内磨细，然后按配方顺序一一溶解，用双蒸馏水定容至500ml。(3)应用液：A、B储存液分别经112.6℃湿热灭菌20min，取A和B液各25ml，加无菌双蒸馏水至450ml，使用前用无菌的3.5%或5.6%NaHCO3调至所需pH。注意：药品必须全部用A.R试剂，并按配方顺序加入，用适量双蒸水溶解，待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品，最后补足水到总量。无Ca2+、Mg2+Hank’s液（Hank’sSolutionwithoutcalcium,magnesiumsulfate）NaCl80g,KCl4g,Na2HPO4·12H2O1.52g，专业技术资料分享 WORD格式可编辑KH2PO40.6g,葡萄糖10g,用双蒸馏水溶解后，加入0.4％酚红溶液50ml，再加入双蒸水至1000ml，112.6℃湿热灭菌20min，4℃冰箱保存。临用前将原液用无菌双蒸水作1：10倍稀释，用无菌的3.5%或5.6%NaHCO3调至所需pH。pH7.2柠檬酸盐缓冲液(CitrateBuffer)柠檬酸0.327g柠檬酸钠2.63g磷酸氢钠0.222葡萄糖0.00255mg蒸馏水加至100ml。pH3.3枸橼酸-磷酸盐缓冲液（Citricacid-PhosphateBuffer)0.131mol/Lcitrateacid，0.066mol/LNa2HPO4，等量混合，调节pH至3.3。0.5mol/LEDTA,pH8.0EDTA·2H2O186.1gNaOH～20g将EDTA·2H2O加入800ml水中，在磁力搅拌器上剧烈搅拌。用NaOH调节pH至8.0，EDTA直到接近pH8.0才完全溶解，定容至1L。分装后高压蒸汽灭菌。0.4%酚红溶液取酚红0.4g置于研钵中逐滴加入1mol/LNaOH溶液11.28ml，边研磨边使酚红转变为钠盐溶于水中，加双蒸水至100ml，过滤后，4℃冰箱保存。醋酸钾（PotassiumAcetate）在60ml5mol/L醋酸钾溶液中，加入11.5ml冰醋酸和28.5ml水。该溶液用于碱性裂解。3mol/L醋酸钠（SodiumAcetate），pH5.2和pH7.0在800ml水中溶解408.1g三水醋酸钠，用冰乙酸调pH至5.2或用稀释乙酸调pH至7.0，加双蒸水至1L。分装后高压灭菌。专业技术资料分享 WORD格式可编辑柠檬酸钠缓冲液(SodiumCitrateBuffer)柠檬酸钠1.8gHCl(1mol)4ml无水乙醇95ml先用100ml去离子水溶解柠檬酸钠，然后加入HCl和无水乙醇，再补充去离子水至总量200ml。饱合硫酸铵溶液(SaturatedAmmoniumSulfateSolution)取500ml双蒸馏水，加入约400克硫酸铵，水浴加热至70℃，磁力搅拌器充分搅拌，直到加入的硫酸铵不再溶解，以氨水（也可用NaOH）调pH7.2，室温保存。二、酶免疫检测常用试剂配制包被液(CoatingBuffer)（pH9.5碳酸盐缓冲液）Na2CO3·10H2O8.58gNaHCO35.8g溶于双蒸水至1000ml。封闭液(Confiningliquid)（5%脱脂乳-PBS溶液，pH7.4）脱脂乳50g加0.02mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）至1000ml溶解。洗液(washingliquid)氯化钠8.0g磷酸二氢钾0.2g磷酸氢二钠（12H2O）2.9g吐温-200.5ml加去离子水至1000ml溶解即可。终止液(stopbuffer)（2mol/LH2SO4）：21.7mlH2SO4加去离子水至200ml。缓冲甘油(glycerinebuffer)甘油9份专业技术资料分享 WORD格式可编辑PB（pH8.0）1份将9份甘油与1份PB合并，充分混匀。0.5%H2O2-甲醇液(HydrogenPeroxide-MethanolSolution)（总体积120ml）3%H2O220ml甲醇100mlDAB-H2O2底物缓冲液(DAB-H2O2SubstrateBuffer)取6mg二氨基联苯胺(3,3’-DiaminobenzidineTetrahydrochlorideDAB)溶解于10ml0.05molTris-HClpH7.6。使用前取0.3%H2O20.1ml加入到DAB溶液中(H2O2的终浓度为0.003%)。如有沉淀生成，则用滤纸过滤。5-溴-4-氯-3吲哚磷酸/四唑氮蓝底物显色液（BCIP/NBTSubstrateSolution）贮存液配制：NBT：在10ml70%的乙醇中溶解0.5gNBT。BCIP：在10ml100%二甲基甲酰胺中溶解0.5gBCIP。贮存液4℃保存，可稳定一年。底物显色液：取66μlNBT贮液与33μlBCIP加入到10ml碱性磷酸酶缓冲液中，充分混匀，底物显色液应在用前1小时内配制。三、细胞相关试剂配制L-谷氨酰胺（L-G）溶液（L-glutaminSolution）（0.2mol/L）称2.9gL-谷氨酰胺（分子量为146.15）用去离子水溶解至100ml，过滤除菌，分装小瓶，4～5ml/瓶，-20℃冻存。100x青-链霉素（双抗）溶液（P/SPenicillin/StreptomycinSolution）取青霉素G（钠盐）100万单位和链霉素（硫酸盐）1g，溶于100ml去离子水中，分装小瓶，4～5ml/瓶，-20℃冻存。7.5%NaHCO3溶液（NaHCO3Solution）称分析纯NaHCO37.5g，用去离子水溶解至l00ml，过滤除菌，分装小瓶，4～5m1/瓶，盖紧瓶塞，4℃保存。HEPES溶液（HEPESSolution）（1mol/L）称23.83gHEPES（N-2-Hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic专业技术资料分享 WORD格式可编辑acid，N-2-羟乙基呱嗪-N'-2-乙基磺酸，分子量为238.3），用去离子水溶解至100ml，过滤除菌，分装小瓶，4～5m1/瓶，4℃保存。氨基喋呤（A）贮存液（AminopterinStockingSolution）（100×,4×10-5mol/L）称1.76mg氨基喋呤（Aminopterin,分子量440.4），溶于90m1去离子水中，滴加lmol/LNaOH0.5m1，并不断搅动，待氨基喋呤完全溶解后，加1mol/L的HCl0.5m1中和，再补加去离子水至100m1。过滤除菌，分装小瓶，2ml/瓶，-20℃冻存。次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷贮存液（HTStockingSolution）（100×,H:10-2mol/L;T:1.6×10-3mol/L）称取136.lmg次黄嘌呤（Hypoxanthine，分子量136.1）和38.8mg胸腺嘧啶核苷（Thymidine，分子量242.2），加去离子水至l00ml，置45～50℃水浴中使完全溶解，过滤除菌，分装小瓶，2m1/瓶，-20℃冻存。用前可置37℃加温助溶。HAT培养液培养液98ml，A贮存液1m1，HT贮存液lml。秋水仙素溶液（colchicineSolution）称取10mg秋水仙素，溶于100m1生理盐水中（即为100μg/ml），过滤除菌后，分装小瓶，－20℃冻存备用。Alsever’s血细胞保存液（Alsever’sSolution）葡萄糖2.05g,柠橡酸钠0.8g,NaCl0.42g，蒸馏水l00ml。以上成分混匀后，微加温使其溶解后，用柠檬酸调节pH6.1，分装于三角瓶中(30～50ml/瓶),113℃湿热灭菌15min，4℃保存备用。细胞冻存液(FreezingMedium)50%小牛血清；40%不完全培养液；10%DMSO（二甲基亚砜）。0.025%胰蛋白酶－0.2%EDTA细胞消化液(Trypsin-EDTASolution)A:2.5%胰蛋白酶:胰蛋白酶2.5g专业技术资料分享 WORD格式可编辑磷酸缓冲盐溶液100ml过滤除菌保存。B:0.2%二乙胺四乙酸二钠（EDTA）EDTA0.2g双蒸馏水100ml高压灭菌保存。取A液1份，加B液99份，混匀，分装-20℃保存。0.83%NH4CI溶液(AmmoniumChlorideSolution)NH4CI0.83gKHCO30.1gEDTA·2Na0.0037g蒸馏水加至100ml。Tris-NH4Cl溶液(Tris-AmmoniumChlorideSolution)NH4Cl3.735g/450ml双蒸水+Tris1.3g/50ml双蒸水（pH7.65）。细胞裂解液（CellLysisSolution）20mmol/LHEPES(pH7.5)150mmol/LNaCl1mmol/LEDTA10mg/mlleupeptin1mmol/LPMSF1%TritonX-1000.5%deoxicholate(sodiumsalt)0.1%SDS组织匀浆缓冲液（HistolysisBuffer）50mmol/LTris-HCl(pH7.5)150mmol/LNaCl1%NP401mmol/Lphenylmethylsulfonylfluoride4mg/mlleupeptin专业技术资料分享 WORD格式可编辑1mg/mlaprotinin细胞核裂解液(NuclearLysisBuffer)10mmol/LTris-HCl(pH8.0)150mmol/LNaCl10mmol/LEDTA蛋白酶K100µg/ml0.4%SDS（最后加）10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）在异丙醇中溶解PMSF至1.74mg/ml，即10mmol/L，分装后保存于-20℃，如果需要的话，可将储存液制备至17.4mg/ml，即100mmol/L的高浓度。闪烁液(ScintillationSolution)PPO(2,5-二苯基)5.0g、POPOP（1,4-双－5－苯基）0.5g溶于1000ml二甲苯中。也可将POPOP加入二甲苯，在37℃水浴上溶解后，再加PPO，然后补足二甲苯。3H-TdR工作液（wokingSolution）按1:20的比例将浓度为1mCi/ml的3H－TdR用无血清的RPMI培养液稀释，终浓度为50µCi/ml。肝素溶液的配制：含有肝素的培养液可以使内皮细胞纯度提高，肝素加入全培养液中最终浓度为50ug/ml。因为现在市售的多为肝素钠，包装为约为0.56克/瓶，配制时，可将其溶于100ml三蒸水中，定容，过夜，然后过滤除菌，分装小瓶，保存温度为4℃。使用时，向100ml培养液中加入1ml（精确可加入0.9ml）即可。Ⅰ型胶原酶：0.1％Ⅰ型胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制和消毒灭菌。注意：因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。分装入10ml小瓶-20℃保存。用时提前一小时37℃复温即可.0.1%的I型胶原酶的配置，100mg的粉末状的I型胶原酶可以溶于100ml的DMEM/F12，0.22微米滤器过滤0.1%的I型胶原酶的配置，100mg的粉末状的I型胶原酶可以溶于100ml的DMEM/F12，0.22微米滤器过滤.专业技术资料分享 WORD格式可编辑四、染色液配制（PreprationofStainingSolution）苏木素液(HematoxylinSolution)：苏木素2.5g，乙醇25.0ml，钾明矾2.5g，氧化汞1.25g，冰乙酸20.0ml，蒸馏水500.0ml。配制方法是先将苏木素溶于乙醇中（稍加热）。将预先已溶解明矾的蒸馏水加入苏木素乙醇液中，使溶液尽快沸腾后，将火焰熄灭，慢慢加入氧化汞，防止溶液油溅出，再煮沸2min。将烧瓶立即浸入冷水中，当染液冷却后，加入醋酸，室温保存，用前过滤。伊红Y染色液(EosinYSolution)伊红Y0.5～1.0g，蒸馏水75ml，95%乙醇25ml，冰乙酸1～2滴。先取少许蒸馏水加入伊红，用玻棒将伊红研碎，再加入全部蒸馏水，溶解后加入乙醇。甲基绿染色液(MethylGreeenSolution)新购买的甲基绿需用氯仿处理去除甲基紫。方法是将2%甲基绿水溶液20ml倾入洁净分液漏斗，移去慢慢下沉带紫红色的氯仿，再加入新的氯仿10ml，如此反复更换氯仿，到无紫红色为止。该液作为贮存液，4℃保存。染色液：甲基绿贮存液5ml，5%派诺宁水溶液1ml，蒸馏水12ml，0.2mol/L乙酸钠(pH4.8)18ml（临用前配制，滤纸过滤）。吖啶橙贮存液(AcridineOrangeStockingSolution)10mg吖啶橙溶解于100mlPBS中，pH4.8～6.0滤过，4℃避光保存。吉姆萨贮存液(GiemsaSolution)吉姆萨染色粉1g先溶于少量甘油，在研钵内研磨30min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66ml)剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。然后再加入甲醇(66ml)，搅匀后保存于棕色瓶中。母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。临用时用pH7.4磷酸缓冲液稀释10倍，随配随用。瑞氏染色液(Wright’sSolution)瑞氏染色粉0.3g甘油3ml甲醇97ml专业技术资料分享 WORD格式可编辑将瑞氏染色粉放干燥研钵内磨细，加入甘油继续研磨，不断滴加甲醇并继续研磨，将上层溶解的染料倒入棕色瓶中，直至染料全溶后加甲醇至所需量。混匀后置棕色瓶中保存，用前过滤。一般配制后置室温一周便可使用，保存时间愈入，则染色效果愈佳。吉姆萨-瑞氏染色液(Giemsa-Wright’sStainingSolution)瑞氏染色粉0.3g吉姆萨染色粉0.03g甲醇100ml将二种粉末置于研钵中磨细，再逐滴加入甲醇混匀后倒入棕色瓶中，塞紧瓶口并充分振荡。置室温溶解后使用。噻唑兰（MTT）称取250mgMTT，加50mlPBS（0.01mol/L，pH7.4）在磁力搅拌器上搅拌30min，用0.22mm的微孔滤膜过滤除菌，分装，4℃保存。两周内有效。台酚蓝染色液(TrypanBlueSolution)A：台酚蓝染料1g蒸馏水100ml将染料置于研钵中边研磨边加入蒸馏水溶解。B：NaCl1.7g蒸馏水100ml临用前A、B液1：1混合，离心沉淀，取上清供染色用。混合后的染液存放过久，易形成沉淀，故应新鲜配制。染色时，取细胞悬液0.1ml加入新鲜配制的染色液一滴，室温下染5～10分钟，取一滴悬液于载波片上，加盖玻片，高倍镜下检查。死亡细胞膨大并染成浅蓝色，活细胞不着色，大小正常。五、固定剂(Fixatives)专业技术资料分享 WORD格式可编辑大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液,pH7.3（formaldehyde-PhasphateBuffer）　多聚甲醛　　　　　　　　40g　　0.1mol/L磷酸缓冲液　　　　　　至1000ml　　配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml0.1mol/L磷酸缓冲液（PhosphateBuffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）至完全溶解，通常需滴加少许1NNaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。　　该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠（formaldehyde-SodiumPhosphate/SodiumHydroxideBuffer）　　A液：多聚甲醛　　　　40g　　蒸馏水　　　　　　　　400ml　　B液：Na2HPO4·2H2O　　　　16.88g　　蒸馏水　　　　　　　　300ml　　C液：NaOH　　　　　　　　　3.86g　　蒸馏水　　　　　　　　200ml配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1NNaOH或1NHCl将pH调至7.2～7.4，最后，补充双蒸水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。专业技术资料分享 WORD格式可编辑六、蛋白电泳相关试剂30％丙烯酰胺（Acrylmide）丙烯酰胺29gN,N’-亚甲双丙烯酰胺1g溶于60ml水中，加热至37℃溶解，补加水至终体积100ml。0.45µM滤器过滤除杂质，置深色瓶中室温保存。考马斯亮蓝R-250染色液（CoomassieStainingSolution）1.称取1g考马斯亮蓝R-250，置于1L烧杯中。2.量取250ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。3.加入100ml的冰醋酸，搅拌均匀。4.加入650ml的去离子水，搅拌均匀。5.用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。考马斯亮蓝脱色液（DestainingSolution）量取下列溶液，置于1L烧杯中，充分混合后使用。醋酸100ml乙醇50mldH2O850ml1mol/L二硫苏糖醇贮存液（DTTStockingSolution）用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于－20℃保存。DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。0.1mol/LpH2.4甘氨酸-HCl缓冲液(Glycine-HClBuffer)称取固体甘氨酸(MW75.07)15.01克，用蒸馏水溶解后，加入0.2mol/LHCl648ml，然后定容成2000ml。2×SDS凝胶加样缓冲液(2×LoadingBuffer)100mmol/LTris.Cl（pH6.8）200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）4%SDS（电泳级）0.2%溴酚蓝20%甘油专业技术资料分享 WORD格式可编辑不含二硫苏糖醇的2×SDS凝胶加样缓冲液可以保存于室温，临用前须从1mol/L二硫苏糖醇（DTT）贮存液现用现加于上述缓冲液。10%十二烷基硫酸钠（SDS）在900ml蒸馏水中溶解100g电泳级SDS,加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。SDS的微细晶粒易于扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS,10%SDS溶液无需灭菌。电转印缓冲液为(Semi-DryTransferBuffer)Tris3gGlycine14.4gSDS0.185g加入甲醇200ml，用去离子水调至1000ml。Tris-乙酸50×（TAE）Tris碱242g冰乙酸57.1ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)100ml蒸馏水定容至1L。Tris-硼酸5×（TBE）Tris碱54g硼酸27.5g0.5mol/LEDTA(pH8.0)20ml蒸馏水定容至1L。TE缓冲液10×(pH7.4,7.6,8.0)1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1mol/LTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)100ml500mmol/LEDTA(pH8.0)20ml2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。4.室温保存。专业技术资料分享 WORD格式可编辑Tris－甘氨酸缓冲液（Tris-GlycineBuffer5×）Tris15.1g甘氨酸（电泳级）94g10％SDS（电泳级）50ml蒸馏水定容至1L。七、淋巴细胞分离液聚蔗糖－泛影葡胺分层液(Ficoll-paqueGradientMixer)90g/L聚蔗糖15ml，加500g/L泛影葡胺10ml（比重1.14)。90g/L聚蔗糖17.5ml，加500g/L泛影葡胺10ml（比重1.13)。90g/L聚蔗糖20ml，加500g/L泛影葡胺10ml（比重1.12)。90g/L聚蔗糖24ml，加500g/L泛影葡胺10ml(比重1.08)。Percoll配制(PreprationofPercoll)将一份10×PBS与9份Percoll贮存液混合，制成等渗Percoll悬液，此悬液被认为是100%Percoll，其密度为1.1294/ml。利用1×PBS或细胞培养液稀释100%Percoll，可获得适宜密度的细胞分层液，用于各种细胞的分离，其浓度与密度的关系如下：70%Percoll比重1.090g/ml60%Percoll比重1.077g/ml50%Percoll比重1.067g/ml40%Percoll比重1.056g/ml30%Percoll比重1.043g/ml20%Percoll比重1.037g/ml人外周血单个核细胞（PBMC）分离Ficoll分层液配制　　9％聚蔗糖（Ficoll）　　　　　　　　　24份　　34％泛影葡胺（Urografin）　　　　　10％　　混合，测比重为1.077～1.078，G5玻璃滤器过滤除菌。4℃冰箱保存备用。专业技术资料分享 WORD格式可编辑八、其它试剂佐剂(Adjuvant)动物实验常用弗氏佐剂（Freundadjuvant），其成分通常是羊毛脂1份、液体石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），充分混合后即是不完全福氏佐剂，如果在每毫升不完全佐剂加入1～20mg卡介苗就成为完全弗氏佐剂。配制方法：将羊毛脂与石蜡油按比例置于容器内，超声波混匀，高压灭菌，4℃保存备用。免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内完全不扩散为止。为避免损失抗原，亦可用一注射器装抗原液，另一注射器装佐剂，二者以聚乙烯塑料管连接，然后二者来回反复抽吸，约数十分钟后即能完全乳化。检查合格后即以其中一注射器作注射用。清洁液(CleaningSolution)配方1：重铬酸钾100g蒸馏水200ml浓硫酸800ml将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为强洗液。盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。配方2：重铬酸钾60g蒸馏水300ml浓硫酸460ml此为中等强度洗液。专业技术资料分享 WORD格式可编辑配方3：重铬酸钾100g蒸馏水750ml浓硫酸250ml此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。（崔雪玲）氨苄青霉素（Ampicillin）    在9ml蒸馏水中溶解1gAmpicillin粉末并定容至10ml，然后用0.22um微孔滤膜过滤除菌，分装成小份存于-20℃。青、链霉素溶液：所用纯净水（双蒸水）需要15磅高压20分钟灭菌。具体操作均在超净台内完成。青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml灭菌双蒸水。链霉素是100万单位/瓶，加5ml灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位。分装于－20℃保存。使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度最终为100单位/ml。3%酸性酒精溶液浓盐酸3ml95%酒精97ml中性红指示剂中性红0．04g95%乙醇28ml蒸馏水72ml中性红pH6.8—8，颜色由红变黄，常用浓度为0．04%淀粉水解试验用碘液(卢戈氏碘液)碘片1g 碘化钾 2g 专业技术资料分享 WORD格式可编辑蒸馏水 300ml 先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。溴甲酚紫指示剂溴甲酚紫 0．04g 0．01mol/L NaOH 7．4ml 蒸馏水92．6ml  溴甲酚紫pH5．2—6．8，颜色由黄变紫，常用浓度为0．04%。溴麝香草酚蓝指示剂溴麝香草酚蓝0．04g 0．01mol/L NaOH 6．4ml 蒸馏水 93．6ml 溴麝香草酚蓝pH6．0—7．6，颜色由黄变蓝，常用浓度为0．04%。甲基红试剂甲基红(Methyl red) 0．04g 95%酒精 60ml 蒸馏水 40ml 先将甲基红溶于95%酒精中，然后加入蒸馏水即可。V．P．试剂1．5%α-萘酚无水酒精溶液α-萘酚5g无水乙醇100ml2．40%KOH溶液KOH40g蒸馏水100ml吲哚试剂对二甲基氨基苯甲醛2g95%乙醇190ml专业技术资料分享 WORD格式可编辑浓盐酸40ml格里斯氏(Griess)试剂A液：对氨基苯磺酸0．5g10%稀醋酸150mlB液：α-萘胺0．1g蒸馏水20ml10%稀醋酸150ml二苯胺试剂二苯胺0．5g溶于100ml浓硫酸中，用20ml蒸馏水稀释十一、阿氏(Alsever)血液保存液柠檬酸三钠·2H2O8g柠檬酸0．5g无水葡萄糖18．7gNaCl4．2g蒸馏水1000ml将各成分溶解于蒸馏水后，用滤纸过滤，分装，0．56—0．70kg/cm2(8—10磅/英寸2)，灭菌20分钟。冰箱保存备用。pH8．6离子强度0．075mol/L巴比妥缓冲液巴比妥2．76g巴比妥钠15．45g蒸馏水1000ml1%离子琼脂琼脂粉1g专业技术资料分享 WORD格式可编辑巴比妥缓冲液50ml蒸馏水50ml1%硫柳汞1滴称取琼脂粉1g先加至50ml蒸馏水中，于沸水浴中加热溶解，然后加入50ml巴比妥缓冲液，再滴加1滴1%硫柳汞溶液防腐，分装试管内，放冰箱中备用。电泳缓冲液  50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA  水 242g  57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L  1％溴酚蓝加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1％二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml的溴化乙锭小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。四常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。专业技术资料分享 WORD格式可编辑羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基五、常用贮存液的配制1．30%丙烯酰胺溶液【配制方法】专业技术资料分享 WORD格式可编辑将29g丙烯酰胺和1gN，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。2．40%丙烯酰胺【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20gN，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。3．放线菌素D溶液【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml100%乙醇中，1：10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液专业技术资料分享 WORD格式可编辑【配制方法】在0.8ml水中溶解60mgATP,用0.1mol/LNaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃5．10mol/L乙酸酰溶液【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。6．10%过硫酸铵溶液【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。7．BCIP溶液【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃8．2×BES缓冲盐溶液【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES、1.6gNaCl和0.027gNa2HPO4，室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。9．1mol/LCaCl2溶液【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54gCaCl2•6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。10．2.5mol/LCaCl2溶液【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2•6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液专业技术资料分享 WORD格式可编辑【配制方法】用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/LTris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。碱基      波长（nm）      消化系数（ε）A      259      1.54×104G      253      1.37×104C      271      9.10×103T      260      7.40×103比色杯光径为1cm时,吸光度=εM13．0.5mol/LEDTA(pH8.0)溶液【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na•2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20gNaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。16．IPTG溶液【配制方法】IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2gIPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。17．1mol/L乙酸镁溶液【配制方法】专业技术资料分享 WORD格式可编辑在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。18．1mol/LMgCl2溶液【配制方法】在800ml水中溶解203.4gMgCl2•6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。【注意】MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。19．β-巯基乙醇（BME）溶液【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。20．NBT溶液【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。21．酚/氯仿溶液【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/LTris•HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/LTris•HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。专业技术资料分享 WORD格式可编辑PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/LPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystaiviolet)2.5克95%酒精25.0毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O1.0克蒸馏水100毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合即成。显微镜镜头清洁剂 将乙醚和乙醇按7∶3混合，装入滴瓶备用。用于擦拭显微镜镜头上油迹和污垢等（注意瓶口必须塞紧，以免挥发）。甘油-酒精软化剂 甘油1份＋50％或70％酒精1份，适用于木材的软化，将木质化根、茎等材料排除空气后浸入软化液中，时间至少一周或更长一些，也可将材料保存于其中备用。 专业技术资料分享