sirna逆转肺耐药相关蛋白表达介导的白血病细胞

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1、SiRNA逆转肺耐药相关蛋白表达介导的白血病细胞【摘要】　　目的：研究双链短干扰RNA（siRNA）对白血病多药耐药细胞模型（K562/NaB）肺耐药相关蛋白（LRP）表达及功能的影响.方法：针对LRP基因设计合成特异性siRNA，在脂质体介导下转染K562/NaB；采用半定量逆转录聚合酶链反应（RTPCR）检测K562细胞LRPmRNA的水平；用流式细胞术检测K562/NaB细胞LRP蛋白表达的变化和细胞内柔红霉素（DNR）的蓄积；MTT法检测阿霉素（ADM）对K562/NaB细胞耐药的半数抑制浓度（IC50）.结果：siRNA转染后：K562/NaB细胞的LRPmRMA水平

2、明显降低；LRP蛋白表达由阳性转为阴性；细胞内DNR的蓄积明显增加，DNR平均荧光增强3.28倍；对ADM药物敏感相对逆转效率为78.18%.结论：siRNA可逆转由LRP介导的白血病细胞多药耐药.【关键词】RNA，小分子干扰；基因，肺耐药相关蛋白；K562细胞；抗药性，多药　　【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectofshortinterferingRNA(siRNA)onexpressionandfunctionoflungresistancerelatedprotein(LRP)inthemultidrugresistanthumanl

3、eukemiacells(K562/NaB).METHODS:MultidrugresistantK562cellsbutyrate(NaB),odelsystem.LRPspecificsiRNARNAerasechainreaction(RTPCR),andproteinlevelandintracellulardaunorubicin(DNR)accumulationinK562/NaBcellsetry.50%inhibitionconcentration(IC50)ofadriamycin(ADM)onK562/NaBcellsethod.RESULTS:LRPmR

4、NAlevelpositiveresulttonegativeresult.IntracellularDNRaccumulationeanfluorescenceofDNReshigher.TherelativeefficiencytoADMultidrugresistanceofleukemiacellsinducedbyLRP.　　【Keyallinterfering;gene,lungresistancerelatedprotein;K562cells;drugresistance,multiple　　0引言　　肺耐药相关蛋白（lungrelatedresistant

5、protein，LRP）是一种新型的与多药耐药（multidrugresistance，MDR）相关的糖蛋白，主要导致细胞内药物聚集缺陷，而在多种肿瘤细胞内引起MDR.在儿童白血病以及成人髓系白血病（AML）中，LRP表达是独立的预后决定因素之一，其过度表达造成患者对化疗不敏感，提示预后不良［1-2］.双链短干扰RNA（shortinterferingRNA，siRNA）介导的RNA干扰（RNAinterference，RNAi），是在特异性抑制哺乳动物细胞基因方面的最新突破［3-4］.我们在建立了经丁酸钠（sodiumbutyrate，NaB）诱导人AML系K562细胞，高表

6、达LRP并介导多药耐药的细胞模型（K562/NaB）的基础上［5］，设计合成了LRP特异性siRNALRP，并转染上述细胞模型，观察siRNALRP抑制LRP基因和蛋白表达、消除LRP改变细胞内药物蓄积和分布作用的效果，以期为逆转LRP介导的肿瘤细胞MDR、提高儿童难治性和复发性白血病化疗效果探索新的方法，并探讨以siRNA介导的RNAi用于肿瘤细胞MDR治疗的可行性.　　1材料和方法　　1.1材料　　AML细胞系K562细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所；单克隆抗体LRP56为Monosan公司产品；固定和破膜试剂盒、藻红蛋白（phycoerythrin，PE）荧光标记羊

7、抗鼠IgG抗体为CaltologLaboratories产品；NaB为Sigma公司产品.　　　　LRP特异性短干涉RNA(siRNALRP)自行设计，由Dharmacon公司合成.浓度20μmmol/L，序列：5′GCUCUUUUCAGUGCCAGACdTdT（正义链），dTdTCGAGAAAAGUCACGGUCUG5′（反义链）.　　1.2方法　　1.2.1K562细胞培养和高表达　　LRP的K562多药耐药细胞模型（K562/N）［10］K562细胞在含100mL/L小牛