拉米夫定治疗chb患者ymdd基因型耐药检测

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1、拉米夫定治疗CHB患者YMDD基因型耐药检测作者：杨柳絮赵中夫韩红莉【摘要】目的：检测拉米夫定(LVD)抗HBV治疗过程中YMDD变异出现的时间和频率。方法：35例慢性乙型肝炎患者入选，接受LVD治疗，100mg/d，疗程52周。分别在治疗前及治疗后12周，20周，24周，36周和52周检测YMDD变异、HBVDNA、ALT和HBVM。结果：20周有1例出现YMDD变异，24周有2例YMDD变异，36周有4例YMDD变异，52周有5例YMDD变异；52周后，HBVDNA转阴率为74.3%(26/35)，ALT复常率为71.4%(2

2、5/35)，HBeAg转阴率为42.9%(15/35)。结论：LVD治疗20周前，换用或联合另一种有效的核苷（酸）类似物，可有效预防YMDD耐药的出现。【关键词】YMDD变异米夫定慢性乙型肝炎AbstractObjective:TodeterminethetimeofLVD-resistanceduringtheantiviraltherapyinpatientsivudine(LVD)100mg/dfor52HBVDNA,alanineaminotransferase(ALT),HBVMandYMDDeasuredat0ent.

3、Results:OnepatientemergedYMDDmutationatent,thereare2patientsand4patientsatergedYMDDmutation,theratesofundetectableHBVDNA,ALTnormalizationandHBeAglossare74.3%,71.4%and42.9%.Conclusion:TheidealtreatmentisthatreceivingLVDfor20utationduringtheantiviraltherapy.Keyutation;L

4、amivudine;ChronicHepatitisB核苷（酸）类似物的出现为慢性乙型肝炎(ChronicHepatitisB,CHB)的治疗打开了新局面，已成为临床上抗HBV治疗的重要手段，其中拉米夫定（LVD）上市最早，临床上应用也最为广泛。它服用方便、安全，具有较强抑制病毒的作用，能显著降低HBVDNA水平，并可使ALT复常，肝组织学显著改善，延缓肝炎疾病的进展和减少肝癌的发生率［１］。但长期应用易致HBV多聚酶结构域的YMDD基序发生变异，导致治疗失败［２］。有报道YMDD变异的发生与用药时间呈正相关。虽然LVD发生耐药与

5、用药时间密切相关，但是关于YMDD基因型耐药出现的最早时间尚未完全确定。本试验以初治CHB患者为研究对象，观察LVD治疗CHB患者的疗效，采用PCR-RFLP方法在治疗不同时间点检测YMDD变异，以此确定YMDD基因型耐药出现的最早时间。1对象与方法1.1研究对象1.1.1病例选择、排除标准：收集2003年1月～2003年6月在我院门诊和病房治疗的CHB患者35例。全部符合2000年西安会议制定的CHB慢性乙型肝炎的诊断标准［３］，所有入选对象均签署治疗知情同意书。①年龄:18岁～65岁间，性别不限;②HBV血清标志物:HBsAg

6、阳性超过6个月,血清HBVDNA≥104拷贝/mL;③筛选前6个月内曾有血清丙氨酸转氨酸(ALT)≥2倍正常值(ULN)，且在入选时血清ALT>1×ULN。④入选前半年内未用过a-干扰素、核苷类抗HBV药物、胸腺肽或其它具有抗HBV作用的药物。筛选时有以下任一条件者排除：①抗HCV、HDV、HIV阳性，患自身免疫性肝炎（抗核抗体滴度>１∶160）；②血清肌酐>1.5mg/dL(≥133μmol/L);③入选时患者ALT>10×ULN，或急性病情加重导致一过性肝脏失代偿；④患其他严重器质性疾病、计划接受肝移植

7、或已进行过肝移植；⑤妊娠或哺乳期妇女。1.1.2治疗方法：35例患者中，男31例，女4例，HBeAg阳性39例，阴性6例。给予LVD100mg/d，在治疗前及治疗后12周，20周，24周，36周和52周检测HBVDNA、ALT、HBVM和YMDD变异。疗程52周。LVD片剂100mg/片，由葛兰素史克医药公司生产，批号不同。1.2PCR-RFLP检测YMDD变异采用PCR-RFLP方法检测YMDD变异株，引物由上海生物工程公司合成，限制性内切酶购自上海生物工程公司，为美国Promega公司产品。HBVYIDD变异检测试剂盒与HBV

8、YVDD变异检测试剂盒由北京大学肝病研究所肝炎试剂研究中心提供。1.2.1HBVDNA的提取：取10μL血清加入50μL裂解液混匀，94℃10min热浴，12000rpm离心3min,弃上清液留沉淀。1.2.2HBVP基因PCR扩增：以提取的HBV